Lacto-N-biosidase

Le^a/Le^a糖脂質は最近ヒト結腸腺癌由来細胞株であるColo205の細胞膜より単離されたラクト系糖脂質で、1型糖鎖の繰り返し構造を持っている^5）。この糖脂質をエンドグリコセラミダーゼで消化して糖鎖を遊離させた後GlycoTAGでPA化したものを基質として、α-1,3/4-Fucosidase（製品コード 4453）^6）とLacto-N-biosidaseで逐次酵素消化を行った。反応生成物の分析はPALPAK Type Nを用いたHPLCで行った。

反応は全て30 mM酢酸ナトリウム緩衝液（pH5.5）中、37℃で30分行った。用いた酵素量は、α-1,3/4-Fucosidaseが0.05μU/pmol糖鎖、Lacto-N-biosidaseは0.5μU/pmol糖鎖である。
1）PA-Le^a/Le^a、40 pmolにα-1,3/4-Fucosidaseを加えて反応後、煮沸して反応を止め10 pmol相当量をHPLCで分析した。
2）残りにLacto-N-biosidaseを加えて反応後、煮沸して反応を止め10 pmol相当量をHPLCで分析した。
3）残りにα-1,3/4-Fucosidaseを加えて反応後、煮沸して反応を止め10 pmol相当量をHPLCで分析した。
4）残りにLacto-N-biosidaseを加えて反応後、煮沸して反応を止め10 pmol相当量をHPLCで分析した。

HPLC分析の結果、PA-Le^a/Le^aは、α-1,3/4-FucosidaseとLacto-N-biosidaseによって、下図に示す様に逐次分解されることがわかった。