腸管出血性大腸菌O-157のベロ毒素遺伝子の検出
【方法】
【結果】
検体を段階希釈し、検出感度を調べた。上のバンドはcontrol、下のバンドはベロ毒素遺伝子由来のバンドである。
TaKaRa Z-Taqを用いることにより、これまでのO-157 One Shot PCR Screening Kitの場合（約160分）の約1/4のPCR反応時間（44分）で同等の検出を行うことができるようになった。これにより、菌体熱抽出液（検体）の調製から電気泳動による検出までのすべての工程を約1時間半で終了できる。また、10 cells/反応系に相当するベロ毒素遺伝子を検出でき、高感度を維持している。
検体数が多く、迅速な判定を必要とする食品の病原微生物検査や臨床検査に、高速PCR用DNAポリメラーゼ、TaKaRa Z-Taqが非常に有効であることが分かる。
- 鋳型DNA：
- 大腸菌O-157菌体熱抽出液
control template EC3 - 増幅ターゲット：
- ベロ毒素遺伝子由来の 171 bp
control template EC3由来の 685 bp - 反応組成およびPCR条件：
-
TaKaRa Z-Taq 使用 ・ 1×Z-Taq Buffer ・ 200 μM dNTP Mixture ・ 400 nM Primer EVC-1 ・ 400 nM Primer EVC-2 ・ 2.5 U TaKaRa Z-Taq ・ control template EC3 ・ O-157菌体熱抽出液（検体） TaKaRa Thermal Cycler Personal使用（Fast mode） 98℃ 10秒
55℃ 10秒
72℃ 7秒35 サイクル Total反応時間：44分 TaKaRa Ex Taq 使用
（O-157 One Shot PCR Screening Kit［製品コード RR102A］使用）・ 1×Ex Taq Buffer ・ 200 μM dNTP Mixture ・ 200 nM Primer EVC-1 ・ 200 nM Primer EVC-2 ・ 2.5 U TaKaRa Ex Taq ・ control template EC3 ・ O-157菌体熱抽出液（検体） TaKaRa Thermal Cycler MP使用 94℃ 1分
55℃ 1分
72℃ 1分35 サイクル 72℃ 10分 Total反応時間：約160分
【結果】
検体を段階希釈し、検出感度を調べた。上のバンドはcontrol、下のバンドはベロ毒素遺伝子由来のバンドである。
| レーン | |
| M： | 100 bp DNA Ladder（製品コード 3407A/B） |
| N： | Negative Control |
| 1： | 1 cell相当/反応系 |
| 2： | 10 cells相当/反応系 |
| 3： | 102 cells相当/反応系 |
| 4： | 103 cells相当/反応系 |
TaKaRa Z-Taqを用いることにより、これまでのO-157 One Shot PCR Screening Kitの場合（約160分）の約1/4のPCR反応時間（44分）で同等の検出を行うことができるようになった。これにより、菌体熱抽出液（検体）の調製から電気泳動による検出までのすべての工程を約1時間半で終了できる。また、10 cells/反応系に相当するベロ毒素遺伝子を検出でき、高感度を維持している。
検体数が多く、迅速な判定を必要とする食品の病原微生物検査や臨床検査に、高速PCR用DNAポリメラーゼ、TaKaRa Z-Taqが非常に有効であることが分かる。
