TaKaRa Z-Taq

コロニーピッキング&PCR


【方法】
plasmid:8 kbp insert in pUC18
宿主:JM109株
primer:M13 primer M4 and RV
polymerase:Z-Taq(2.5 U/μl)

爪楊枝でプレートからコロニーをピックアップし、100 μlのdH2Oに懸濁。うち10 μlをPCRのtemplateとした。

PCR条件
  98℃/ 5 sec  ┐

 25 cycles(total約60 min)

 ┘
55℃/ 5 sec
72℃/ 90 sec
(TaKaRa Thermal Cycler PERSONAL, Fast mode)


【結果】


M1 λHind III marker
1~9  single colony
10 no insert colony(pUC18の場合、no insertでは123 bpにバンドがでる。)
M2 pHY marker
1% agarose gel, 8 μl apply

  TaKaRa Z-Taq