TaKaRa Z-Taq™

Z-TaqのRT-PCRへの応用（RNA PCR Kit（AMV）Ver.2.1との併用）

【方法】

＜逆転写反応＞

	試薬	最終濃度

	MgCl2	5 mM
	10×RNA PCR buffer	1×
	Rnase free H2O
	dNTP mixture	1 mM
	Rnase Inhibitor	1 U/μl
	AMV Rtase	0.25 U/μl
	OligodT-Adaptor primer	0.125 μM
	HT29 total RNA	1 μg/20 μl

		20 μl

Control：

	試薬	最終濃度

	左記RT溶液	（20 μl）
	MgCl2	2.5 mM
	10×RNA PCR buffer	1×
	Taq pol.	2.5 U/100 μl
	Sense primer	0.2 μM
	Antisense primer	0.2 μM

	H2O	up to 100 μl

Taq使用

＜PCR＞

	試薬	最終濃度

	左記RT溶液	（20 μl）
	10×Z-Taq buffer	1×
	Z-Taq	2.5 U/100 μl
	Sense primer	0.2 μM
	Antisense primer	0.2 μM

	H2O	up to 100 μl

Z-Taq使用

【実験例】

　ヒトトランスフェリンレセプター領域 2 kbpの増幅

1％ agarose gel, 8 μl apply

　

M
：λHind III marker

1, 5
：PCR条件（A）

2, 6
：PCR条件（B）

3, 7
：PCR条件（C）

4, 8
：PCR条件（D）

【PCR条件】

（A）

94℃、

30 sec

　┐
　30 cycles
　┘

55℃、
30 sec

72℃、
2 min

（B）

98℃、

5 sec

　┐
　30 cycles
　┘

55℃、
5 sec

72℃、
10 sec

（C）

98℃、

5 sec

　┐
　30 cycles
　┘

55℃、
5 sec

72℃、
20 sec

（D）

98℃、

5 sec

　┐
　30 cycles
　┘

55℃、
5 sec

72℃、
30 sec

TaKaRa Z-Taq™

1％ agarose gel, 8 μl apply

M	：λHind III marker
1, 5	：PCR条件（A）
2, 6	：PCR条件（B）
3, 7	：PCR条件（C）
4, 8	：PCR条件（D）

【PCR条件】
（A）	94℃、	30 sec	┐ 　30 cycles 　┘
	55℃、	30 sec
	72℃、	2 min
（B）	98℃、	5 sec	┐ 　30 cycles 　┘
	55℃、	5 sec
	72℃、	10 sec
（C）	98℃、	5 sec	┐ 　30 cycles 　┘
	55℃、	5 sec
	72℃、	20 sec
（D）	98℃、	5 sec	┐ 　30 cycles 　┘
	55℃、	5 sec
	72℃、	30 sec