大腸菌のゲノムDNAを鋳型として2 kbの増幅反応を種々の量の鋳型を用いて行った。
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Template |
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JM109ゲノムDNA |
:10 pg, 100 pg, 1 ng/50 μl |
酵素量 |
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PyrobestDNA Polymerase |
:1.25 U/50 μl |
S社DNA Polymerase |
:1.25 U/50 μl |
PCR反応条件: |
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94℃ 30 sec
58℃ 30 sec
72℃ 1 min 30 sec |
┐ │ ┘ |
30 cycle |
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サーマルサイクラー |
:TaKaRa PCR Thermal Cycler MP |
ゲル |
:1% Agarose L03「TAKARA」(製品コード 5003) | アプライ量 |
:5 μl/50 μl反応液 |
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レーン |
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1: |
PyrobestDNA Polymerase/Pyrobest Buffer |
2: |
PyrobestDNA Polymerase/Pyrobest Buffer II |
3: |
S社DNA Polymerase |
M: |
pHY Marker |
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Pyrobest Buffer IIを用いて反応を行うことにより、今までのbufferでは増幅産物の認められなかった10 pg/50 μlの鋳型量においても増幅が確認された。また、100 pg/50 μl, 1 ng/50 μlの鋳型量においても増幅産物量の増大が認められた。一方、S社DNA Polymeraseは、このターゲットの増幅に関しては適さないようで、1 ng/50 μlの鋳型量においても増幅が確認できなかった。