Polyclonal Anti-Mouse Osteocalcin

材　　料：

生後3週齢マウスの顎骨

操作手順：

1）4％パラホルムアルデヒド溶液による固定

2）10％EDTAによる脱灰　4℃、1週間

3）アルコールによる脱水

4）キシレン透徹

5）パラフィン包埋

6）薄切

一次抗体：

抗マウスOC（1-20）・ウサギポリクローナル抗体　使用濃度　0.7 μg/ml

組織切片：

マウスのEDTA脱灰パラフィン包埋切片

検出方法：

sABCシステム（DAKO社）

操作手順：

1）脱パラフィン

2）抗原賦活法：トリプシンで37℃、20分処理（トリプシン溶液の組成：トリプシン25 mg、0.01 M PBS ml）。

3）非特異的タンパク質のブロッキング

4）一次抗体　4℃、一晩

5）ビオチン標識二次抗体　室温30分

6）内因性ペルオキシダーゼのブロッキング

7）StreptABComplex　室温30分

8）DAB反応

9）対比染色（メチルグリーン）

10）脱水・透徹・封入

A：

顎骨の骨梁に沿って見られる骨芽細胞（ob）に強い陽性反応が認められる。

B：

Aの骨芽細胞の強拡大

C：

骨基質（b）に免疫反応が認められる。

D：

上顎切歯根尖孔付近。前象牙芽細胞（pod）から分化した象牙芽細胞（od）に強い陽性反応が認められる。

E：

Dの象牙芽細胞の強拡大。

F：

上顎切歯のDより切端側の象牙芽細胞に強い陽性反応が認められる。