蛍光タンパク質（DsRed-Express）発現ベクターの構築
pBApo-CMVベクターシリーズ（製品コード 3240～3242）
- pBApo-CMV Neo DNA（製品コード 3240）をBamH IとXba Iで消化後、アガロースゲル電気泳動を行い、約4.6 kbpのDNA断片を回収した。
- pDsRed-Express Vector（製品コード 632412）から切り出したDsRed-Express遺伝子のDNA断片と消化済みpBApo-CMV NeoをDNA Ligation Kit <Mighty Mix>を用いてライゲ－ションした。
- 大腸菌コンピテントセルJM109に導入し、アンピシリンを含むLBプレートにまいた。
- 得られたコロニーを2～5 ml LB Amp液体培地に培養し、プラスミドを調製した。
- あらかじめ培養しておいた293細胞に、遺伝子導入試薬TransIT-293（製品コード MIR2704）を使用してプラスミドを導入した。
- 2日後に蛍光顕微鏡で観察し、DsRed-Expressの発現を確認した。（下図参照）
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図 蛍光顕微鏡画像 pBApo-CMV Neo／DsRed-Express トランスフェクション後、2日目 |
