E. coli DH5α Electro-Cells

Protocol 1
プラスミドベクターを用いた形質転換

1. Electro-Cells（50 μl）を使用直前に氷中で融解する。
2. 融解したElectro-Cellsに1～2 μlのDNA溶液を加える（塩の含まれる試料溶液の場合にはエタノール沈殿による脱塩を行うとよい）。
3. Electro-CellsおよびDNAの混合液をあらかじめ氷冷しておいた0.1 cmキュベットに注入する。
4. パルスを印加後*、直ちに氷冷しておいた1 mlのSOC培地を加える。
5. 37℃で1時間振とうする（160～225 rpm）。
6. プレートに適当量をまく。
7. 37℃で一晩放置する。

* TaKaRaではBIO-RAD社製のジーンパルサー（説明書の電圧条件、抵抗値200Ω）またはE.coliパルサー（説明書の電圧条件）を用いて行っている。

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Protocol 2
M13ファージベクターDNAを用いた形質導入

1. プラスミドベクターの形質転換の1. ～5. までの操作を行う。
2. 3.5 mlのYT-soft agar（46～48℃に保温）に、200 μlの宿主菌（A600 ＝ 0.8～1.0）を加える。
3. 1. の適当量を2. のagarに混和し、すばやくYT-プレート上に広げる。
4. プレートを室温で10～15分間置いた後、37℃で一晩インキュベートする。

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Note
使用上の注意

• 運搬時は、ドライアイス/エタノールに入れる。
• 使用しない分は、ドライアイス/エタノール中にて凍結させ、－80℃で保存する。Falconチューブ（Falcon Code No. 2059または2057）の他、エッペンドルフチューブを用いても形質転換は可能だが、効率は若干悪くなる。
• 50 μl Electro-Cellsを用いる場合、形質転換するDNAの量を、高純度なもので10 ng以下にしないと、効率は悪くなる。
• 分子量の大きなDNA（＞7 kb）を導入する場合には形質転換効率の低下がみられる。
• スケール（セルの量等）を変えたり、他のチューブやキュベットを用いたりする場合には、最適の条件を選ぶ。
• SOC培地の他、LB培地やΨb-brothでもかまわないが、若干の効率低下がみられることがある。
• SOC培地
  

  2％	Bacto tryptone
  0.5％	Bacto yeast extract
  10 mM	NaCl
  2.5 mM	KCl
  10 mM	MgSO4
  10 mM	MgCl2
  20 mM	Glucose

  Mg^2＋溶液およびGlucoseを除き、オートクレーブした後、あらかじめ0.22 μmのフィルターを通した2M Mg^2＋stock溶液（1M MgSO₄＋1M MgCl₂）並びに2M Glucose溶液を加え、再び0.22 μmのフィルターを通す。
• LB培地 （1 l あたり）
  

  10 g	Bacto tryptone
  5 g	Bacto yeast extract
  5 g	NaCl

  1 N NaOHでpH7.5前後に調整し、オートクレーブする。
• Ψb-broth （1 l あたり）
  

  20 g	Bacto tryptone
  5 g	Bacto yeast extract
  5 g	MgSO4・7H2O

  　1 N KOHでpH7.5前後に調整し、オートクレーブする。
  希釈が必要な場合は、4.で加えた培地で行う。
• YT-soft agar（100 mlあたり）
  

  0.8 g	Bacto tryptone
  0.5 g	Bacto yeast extract
  0.5 g	NaCl

  　1 N NaOHでpH7.6前後に調整し、0.6％になるようagarを添加しオートクレーブする。
• YT-プレート（1 lあたり）
  

  8 g	Bacto tryptone
  5 g	Bacto yeast extract
  5 g	NaCl

  　1 N NaOHでpH7.6前後に調整し、1.5％になるようagarを添加しオートクレーブする。
• 宿主菌は、Electro-Cellsから培養することができる。