簡便な酢酸リチウム法（one-step transformation method）による酵母の形質転換
Aureobasidin A（製品コード 630466）
キット以外に必要な試薬
| SD培地 （サブローデキストロース培地） |
： | 1％ Polypeptone S、2％ D-glucose |
| YPD 培地 | ： | 1％Yeast extract、2％ Polypeptone、2％ D-glucose |
| YPD 寒天培地 | ： | YPD培地に2％の寒天を加える。 |
| 選択培地 | ： | ≧ 0.5 μg/ml Aureobasidin Aを含むYPD寒天培地。 |
| Aureobasidin A ストック溶液 | ： | 500 μg/mlとなるようにエタノールまたはメタノールに溶解。 4℃保存（長期保存可）。 |
| Carrier DNA | ： | サケ精子DNA（10 mg/ml）を超音波処理で切断（3 kbp～15 kbp）後、10分間、100℃処理し急冷後、使用する。 |
| One-step buffer | ： | 2 M Lithium acetate（pH5.0）、50％ Polyethylene glycol 3350（Sigma）、1 M Dithiothreitolを使用直前に1:8:1に混合して使用 |
| TE buffer | ： | 10 mM Tris-HCl（pH7.0）、1 mM EDTA |
操作手順
宿主株をSD培地またはYPD培地（5 ml）で一晩培養する
↓
15 OD660ユニット相当分（5×107～1×108 cells）を集菌する
↓
TE bufferで洗浄、集菌する
↓
菌体にOne-step buffer 100 μlとDNA 15 μlを添加する（plasmid DNA 5 μg＋carrier DNA 100 μg）
↓
Vortexで手早く混ぜる
↓
45℃で30分間インキュベートする
↓
室温に5～8分間静置する
↓
5,000 rpm×1分間遠心して集菌する
↓
YPD培地5～10 mlに懸濁し、30℃で一晩培養する
↓
集菌・洗浄後、生理食塩水に懸濁する
↓
Aureobasidin Aを含むYPD選択プレートに100 μlずつ塗布する
↓
30℃で培養する
2～4日でAureobasidin A耐性クローンが生育する
宿主株をSD培地またはYPD培地（5 ml）で一晩培養する
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15 OD660ユニット相当分（5×107～1×108 cells）を集菌する
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TE bufferで洗浄、集菌する
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菌体にOne-step buffer 100 μlとDNA 15 μlを添加する（plasmid DNA 5 μg＋carrier DNA 100 μg）
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Vortexで手早く混ぜる
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45℃で30分間インキュベートする
↓
室温に5～8分間静置する
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5,000 rpm×1分間遠心して集菌する
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YPD培地5～10 mlに懸濁し、30℃で一晩培養する
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集菌・洗浄後、生理食塩水に懸濁する
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Aureobasidin Aを含むYPD選択プレートに100 μlずつ塗布する
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30℃で培養する
2～4日でAureobasidin A耐性クローンが生育する
