Aureobasidin A

Aureobasidin A（AbA；分子量 1,100）は、黒色酵母Aureobasidium pullulans R106株より単離された環状デプシペプチドの抗真菌抗生物質である（図1）。Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe、Candida albicans、Kluyveromyces lactis、一部のAspergillus等の真菌類に対して低濃度（0.1～0.5 μg/ml）で殺菌的に作用する。
AbAは、酵母のaur1遺伝子にコードされる酵素、inositol phosphorylceramide(IPC) synthaseに阻害的に作用することで細胞死を引き起こし（1、2）、ドミナント変異アレルであるAUR1-C遺伝子の発現は酵母にAbA耐性を付与することが明らかとなっている。Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid Systemでは、4つめのレポーター遺伝子としてこのAbA耐性遺伝子AUR1-Cを新しく採用した。
Matchmaker Gold Yeast One-Hybrid Library Screening Systemでも、AUR1-Cをレポーターとして採用することで、より簡便で厳密なスクリーニングが可能になった。

従来のHIS3遺伝子などを用いた栄養要求性による一次スクリーニングでは、多数の偽陽性クローンを生じていたが、AbAは酵母に対して強い毒性を示すため、AbA耐性を用いたスクリーニングでは偽陽性クローンの出現が大幅に低減される。
Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid Systemでは、AbAのみを用いた一次スクリーニングで得られたクローンに対して、4つのレポーター遺伝子（AUR1-C、HIS3、ADE2、MEL1）を用いて厳密な選択性の二次スクリーニングを実施することで真の陽性クローンをより確実に獲得できる。


図1. Aureobasidin Aの構造式

表1. 種々の真菌に対するAureobasidin Aの最小生育阻止濃度（MIC）

菌株		MIC（μg/ml）
S. cerevisiae	ATCC9763（二倍体）	0.2～0.4
	SH3328（一倍体）	0.1
	清酒酵母協会701号（二倍体）	0.1～0.2
	焼酎酵母協会2号（二倍体）	0.1
	ビール酵母（三又は四倍体）	0.1
	パン酵母（二倍体）	0.2～0.4
Schizo. pombe	JY-745（一倍体）	0.1
C. glabrata	TIMM-1062	0.1-0.2
C. albicans*	TIMM-0136（二倍体）	0.04
C. tropicalis*	TIMM-0324（二倍体）	0.08
K. lactis	IFO1267	0.05
K. marxianus	IFO1735	0.2
A. nidulans	FGSC89	2.5

（* これらの菌株にはpAURベクターは使用できません。）

Aureobasidium pullulans No. R106

＜Aureobasidin Aの作用機作＞
Nagiecらにより、S. cerevisiaeにおけるスフィンゴ脂質の生合成に必須の酵素としてinositolphosphoryl-ceramide（IPC）synthaseが発見されている^8）。この酵素は、酵母、カビ、植物に特異的に分布しており^9）、フィトセラミドとホスファチジルイノシトールから IPC を生成する反応を触媒している（図1）。TaKaRaが見いだしたAureobasidin A感受性遺伝子aur1は、このIPC synthaseをコードしていると考えられる。また、Nagiecら^8）によって、Aureobasidin AがこのIPC synthtase活性を阻害し（IC₅₀="0".2 nM）、それによって細胞内に蓄積したセラミドが細胞死を引き起こしているであろうことが明らかにされている。

図1.　酵母のイノシトール　スフィンゴ脂質合成系^10）

メタノールまたはエタノールに0.5～5.0 mg/mlの濃度に溶解し、保存液とする。溶解後は4℃保存。水に難溶。

室温乾燥保存（溶解後は4℃）

凍結乾燥品

HPLC分析により95％以上のAureobasidin Aを含むことを確認している。