Bacillus cereus (CRS gene) PCR Detection Kit

1. 菌体を直接PCRにかける場合
   

   (1)	プレート (NGKG培地*1など) 上のコロニーから、滅菌済みマイクロピペット用チップなどで微量の菌体をとり、滅菌精製水100 μlに懸濁する。
   (2)	95℃で5分間、熱処理する。
   (3)	1 μlをPCRに用いる。

2. 培養法を組み合わせて、食品等から菌を回収してPCRを行う場合
   

   (1)	被験試料にポリミキシン添加SCD培地*2を10倍量加え、細菌検査用ホモジナイザー (ストッカー等) で破砕混合後、35℃で数時間～一晩培養する。
   (2)	培養液1.3 mlを1,000 rpm (約100×g) で1分間遠心後、その上清の1.0～1.2 mlを新しいチューブに取り、12,000 rpm (約13,000×g) で3分間遠心する。
   (3)	上清を除去し、沈殿を100 μlのTE buffer (10 mM Tris-HCl、0.1 mM EDTA、pH8.0) にて懸濁後、95℃、5分間加熱処理して、1 μlをPCR反応に用いる。

PCR反応阻害がかかる場合、さらに希釈してPCRサンプルとして用いてください。

*1 NGKG培地：セレウス菌分離用培地　日水製薬(株)
*2 SCD培地：トリプトソーヤブイヨン　日水製薬(株)