使用例
| 1．方法 | |
| pDON-AI-2 Neo DNA、pDON-AI-2 DNA、pMEI-5 Neo DNA、pMEI-5 DNA、pDON-5 Neo DNA、pDON-5 DNA（製品コード 3653、3654、3655、3656、3657、3658）のBamH I/Hpa IサイトにZsGreen遺伝子を挿入し、pDON-AI-2 Neo-ZsGreen、pDON-AI-2-ZsGreen、pMEI-5 Neo-ZsGreen、pMEI-5-ZsGreen、pDON-5 Neo-ZsGreen、pDON-5 DNA-ZsGreenベクターを作製した。Retrovirus Packaging Kit Ampho（製品コード 6161）を用いてG3T-hi細胞（製品コード 6163）へ導入し、一過性の組換えレトロウイルスを産生した。 | |
| 2．結果 | |
| 2-1．ウイルスタイターの比較（表1、図1） | |
| （1） | HT1080細胞へ段階希釈したレトロウイルスベクターをポリブレン存在下にて感染させ、フローサイトメーターにてZsGreenの導入効率を測定し、ウイルスタイターを算出した。 |
| （2） | HT1080細胞へ段階希釈したレトロウイルスベクターを感染させ、G418にて薬剤選択を行い形成されたコロニー数よりウイルスタイターを算出した。（Neoシリーズのみ） |
| （3） | Retrovirus Titer Set (for Real Time PCR)（製品コード 6166）を使用し、レトロウイルスベクターのRNAゲノム量を測定し、RNAタイターを算出した。タイター算出用のスタンダードとして、（1）の方法にてあらかじめ生物学的タイターを算出したDON-AI-2-ZsGreenレトロウイルスを使用した。 |
表1：ウイルスタイターの比較
| （1）ZsGreen/ HT1080 |
（2）G418/ HT1080 |
（3）RNA titer | |
| ivp/ml | cfu/ml | ivp/ml | |
| DON-AI-2 Neo | 4.08×106 | 4.43×106 | 1.01×107 |
| DON-AI-2 | 7.35×106 | - | 2.23×107 |
| MEI-5 Neo | 3.96×105 | 5.88×105 | 8.47×105 |
| MEI-5 | 1.31×106 | - | 2.48×106 |
| DON-5 Neo | 2.65×106 | 3.83×106 | 6.81×106 |
| DON-5 | 3.26×106 | - | 8.59×106 |
| 2-2．発現強度の比較（図2） |
| レトロウイルスベクターを種々の希釈倍率にてポリブレンを用いた方法でHT1080細胞へ感染させた。感染3日後に、フローサイトメーターを用いて遺伝子導入効率およびZsGreen発現強度を測定した。遺伝子導入効率が20％以下の希釈倍率での発現強度をsingle copy導入細胞とみなし、発現強度の比較を行った。各細胞でのDON-AI-2ウイルスベクターの発現強度を1とした時の値を示す。 |
