SapphireAmp^® Fast PCR Master Mix

マウスcDNA由来pUC118ライブラリー（0.5 kb～5 kbのフラグメントを挿入）を形質転換した大腸菌コロニーに対し、コロニーPCRによるインサートチェックを行った。

1. 反応数＋α分のマスターミックスを調製し、50 μlずつPCRチューブに分注しておく。
   
   例）8サンプルの反応を行う場合

   	1反応分	9反応分
   SapphireAmp Fast PCR Master Mix（2×Premix）	25 μl	225 μl
   M13 Primer M4（20 μM）	0.5 μl	4.5 μl
   M13 Primer RV（20 μM）	0.5 μl	4.5 μl
   dH2O（滅菌水）	24 μl	216 μl

2. 大腸菌コロニーを滅菌マイクロチップの先でごく少量掻きとり、1. のPCRチューブの反応液に懸濁してPCRを行う。
   PCR条件
   94℃　1 min.
   　↓
   

   98℃　5 sec. 55℃　5 sec. 72℃　40 sec.

   30 cycles

   （PCR所要時間：1時間11分、TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice使用）
   
   電気泳動結果
   
   反応液5 μl泳動　　　1％ Agarose L03
   
   

   1～8	：	コロニーPCR
   M	：	250 bp DNA Ladder (Dye Plus)

   
   電気泳動にて各種サイズ（0.5 kb～5 kb）の増幅産物が確認できた。