高速PCR用 Dye入りプレミックス試薬
- 伸長時間「10秒/kb」の高速PCRを実現するDye入りプレミックス試薬
- プライマーと鋳型DNAを加えるだけの簡単操作、反応後はそのまま電気泳動に使用可能
- ホットスタートPCR酵素であり、反応液の室温調製が可能
- コロニーPCRにも最適
製品説明
SapphireAmp Fast PCR Master Mixは、伸長時間10秒/kbの高速反応が可能なPCR用Dye入りプレミックス試薬である。
高速PCRに必要なコンポーネント（最適化したバッファー、PCR酵素、dNTP Mixture等）と、アガロースゲル電気泳動操作時に便利な色素マーカー（青）ならびに比重増加剤を含む2倍濃度のプレミックスタイプで、ホットスタートPCR用酵素である。
プライマーと鋳型DNAを加えるだけで簡単に高速PCRを行うことができ、反応後は反応液を直接電気泳動に供することもできるため、飛躍的に作業効率を向上できる。
本製品は大腸菌のコロニーPCRによるインサートチェック（5 kb前後までの増幅を推奨）にも適しており、短時間で結果が得られる（5 kbの増幅所要時間；約1時間15分）。また、ヒトゲノムDNA を鋳型としたPCRで6 kbの増幅を確認している。
高速PCRに必要なコンポーネント（最適化したバッファー、PCR酵素、dNTP Mixture等）と、アガロースゲル電気泳動操作時に便利な色素マーカー（青）ならびに比重増加剤を含む2倍濃度のプレミックスタイプで、ホットスタートPCR用酵素である。
プライマーと鋳型DNAを加えるだけで簡単に高速PCRを行うことができ、反応後は反応液を直接電気泳動に供することもできるため、飛躍的に作業効率を向上できる。
本製品は大腸菌のコロニーPCRによるインサートチェック（5 kb前後までの増幅を推奨）にも適しており、短時間で結果が得られる（5 kbの増幅所要時間；約1時間15分）。また、ヒトゲノムDNA を鋳型としたPCRで6 kbの増幅を確認している。
内容
（50 μl反応系×160回）
| SapphireAmp Fast PCR Master Mix（2×Premix） | 1 ml×4 |
| dH2O | 1 ml×4 |
保存
－20℃（4℃で3ヵ月保存可能）
過度な凍結融解の繰り返しは活性が低下する場合があります。使用頻度が高い場合、いったん融解したものは4℃保存をお勧めします。
使用前には、転倒混和後スピンダウンしてください。
過度な凍結融解の繰り返しは活性が低下する場合があります。使用頻度が高い場合、いったん融解したものは4℃保存をお勧めします。
使用前には、転倒混和後スピンダウンしてください。
用途
- DNA、cDNAのPCR増幅
- コロニーPCR等
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
PCR産物について
SapphireAmp Fast PCR Master Mixを用いて増幅したPCR産物のほとんどは、3’末端にAが1塩基付加されている。したがって、PCR産物をそのままT-Vector［pMD20（製品コード 3270）、pMD19(Simple)（製品コード 3271）など］にクローニングすることができる。また、末端平滑化およびリン酸化を行って、平滑末端のベクターにクローニングすることも可能である。
色素マーカーについて
反応液5 μlを1％ Agarose L03「TAKARA」（製品コード 5003、5003B）で泳動した場合、青色マーカーは3～5 kb付近および1 kb付近の位置に確認できる。また、色素は260 nm付近、620 nm付近に吸収をもつが、ゲル切り出しやNucleoSpin Gel and PCR Clean-up（製品コード 740609.10/.50/.250）による増幅産物のクリーンアップなどでDNAを回収すると除去することができる。
一般的なPCR反応液組成（total 50 μl）
| SapphireAmp Fast PCR Master Mix（2×Premix） | 25 μl | |
| Forward Primer | 0.2 μM（final conc.） | |
| Reverse Primer | 0.2 μM（final conc.） | |
| Template | ヒトゲノムDNA またはプラスミドDNA | 50～100 ng 100 pg～10 ng |
| dH2O | up to 50 μl | |
PCR条件（例）
マウスおよびヒトゲノムDNA（増幅サイズ：～2 kb）、細菌ゲノムDNA（～6 kb）、コロニーPCR（～6 kb）の場合
3 step PCR
マウスおよびヒトゲノムDNA（増幅サイズ：2 kb～6 kb）の場合
2 step PCR
注）変性条件は、サーマルサイクラーの使用機種と反応チューブの種類に合わせて設定する。設定の目安は、98℃ 5～10 sec.、あるいは94℃ 20～30 sec.。
3 step PCR
94℃ 1 min. →
98℃ 5 sec.
55℃ 5 sec.
72℃ 10 sec./kb*
30 cycles
* 1 kb以下は5 sec.に設定
注）変性条件は、サーマルサイクラーの使用機種と反応チューブの種類に合わせて設定する。設定の目安は、98℃ 5～10 sec.、あるいは94℃ 20～30 sec.。マウスおよびヒトゲノムDNA（増幅サイズ：2 kb～6 kb）の場合
2 step PCR
94℃ 1 min. →
98℃ 5 sec.
68℃ 30 sec./kb
30 cycles
Application
BIO VIEW / Clontechniques
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