核酸抽出

PCR産物の精製・アガロースゲルからのDNA抽出プロトコール（NucleoSpin^® Gel and PCR Clean-up）

NucleoSpin Gel and PCR Clean-up（製品コード 740609.10、740609.50、740609.250）

	PCR産物の精製	アガロースゲルからのDNA抽出
1. サンプルの準備	PCR反応液100 μlあたりBuffer NTIを200 μl加える。*1 溶液が黄色であることを確認する。	アガロース100 mgあたりBuffer NTIを200 μl加える。*2 50℃で5～10分間インキュベートする。 ゲルが完全に溶解するまで、2～3分ごとにサンプルを軽くボルテックスする。 溶液が黄色であることを確認する。
2. カラムへの吸着	NucleoSpin Gel and PCR Clean-up ColumnをCollection Tube (2 ml)にセットする。 1の溶液をカラムに添加し、11,000×g、30秒間遠心する。 ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
3. メンブレンの洗浄	Wash Buffer NT3*3 700 μlをカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心する。 ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。*4
4. メンブレンの乾燥	カラムを、11,000×gで1分間遠心する。
5. DNAの溶出	カラムをマイクロチューブ（1.5 ml：各自で用意）にセットする。 Buffer NE*5 15～30 μlを加え、室温で1分間インキュベートした後、11,000×gで1分間遠心する。

*1	PCR反応液が少量（< 30 μl）の場合、滅菌水を加えてTotal 50-100 μｌに調製し、調製した溶液の2倍量の Buffer NTIを加える。 MightAmp DNA Polymerase Ver.2（製品コード R071A）などのMightyAmpシリーズのPCR酵素やTks Gflex DNA Polymerase（製品コード R060A）を用いて増幅したPCR産物の場合は、PCR反応液を滅菌水で1.5～2倍に希釈し、希釈した溶液の2倍量のBuffer NTIを加える。
*2	2%以上のアガロースゲルの場合は、使用するBuffer NTIの量を2倍にしてください。
*3	Wash Buffer NT3：Wash Buffer NT3 (Concentrate) 6 mlあたり、96～100%エタノール24 mlを添加する。
*4	高純度のDNAが必要な場合は、「3. メンブレンの洗浄」のステップを繰り返して行ってください。A260/A230の値が高くなり、純度が上がります。
*5	5～10 kbのDNAを回収する際は、あらかじめ70℃に加熱したBuffer NEを用いると、収率が上がる。 Buffer NEの組成：5 mM Tris-HCl, pH8.5

使用時には、添付の英文説明書をご確認ください。