TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit

TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit（Uracil DNA Glycosylase（UNG）, heat - labile)を使用した場合

【方法】

Uracil - N - glycosylase（UNG）を用いてキャリーオーバーの影響を防止するPCR反応系では、不完全なUNGの熱失活により、増幅産物が分解されて誤ったPCR検査結果を導く場合がある。特に、ターゲット量が微量で増幅産物が少ない場合に注意が必要である。 TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit（Uracil DNA Glycosylase（UNG）, heat - labileを使用）とTaKaRa Taq Hot Start Versionを用いて、ヒトゲノムDNAから約1 kbの遺伝子断片をPCR増幅した。比較のため、他社製熱感受性UNGを推奨量添加した系でも反応を行った。PCR後、反応液を25℃で72時間または96時間保温放置して、残存するUNG活性によるPCR産物への影響を比較した。

【結果】	Uracil DNA Glycosylase（UNG）, heat - labileを添加して行ったPCR反応系では、室温で96時間置いた後も増幅産物の分解は見られなかった。

PCR条件

25℃	10分	（UNG処理）
95℃	2分	（UNGの熱失活）
94℃	10秒	35サイクル
55℃	30秒
72℃	1分

1．	コントロール（鋳型なし）
2．	UNG非添加
3．	Uracil DNA Glycosylase（UNG）, heat-labile
4．	他社熱感受性UNG
M．	100 bp DNA Ladder