| NucleoSpin Plasmid | NucleoSpin Plasmid (NoLid) |
| 1. | 培養液の調製
集菌
|  | | 大腸菌の培養液1～5 mlを11,000×gで30秒間遠心し、上清をできるだけ除去する。 |
|
| 2. | 菌の溶解 |  | | 細胞ペレットにBuffer A1（+ RNase A)*1250 μlを加え、ボルテックスまたはピペッテイングで完全に溶解する。
Buffer A2*2 250 μｌを加え、チューブを6～8回反転して穏やかに混合する。ボルテックスはしてはならない。
5分間またはライセートが清澄化するまで室温で静置する。
Buffer A3 300 μｌを加え、チューブを6～8回反転して穏やかに混合する。ボルテックスはしてはならない。 |
|
| 3. | ライセートの清澄化 |  | | 2の溶液を11,000×g、5分間室温で遠心する。
上清が清澄化するまでこのステップを繰り返す。 |
|
| 4. | カラムへの吸着 |  |  | NucleoSpin Plasmid ColumnをCollection Tube (2 ml)にセットする。
3の上清を最大750 μlをカラムに添加し、11,000×g、1分間遠心する。
ろ液を捨て、カラムを同じCollection Tubeにセットする。
残りの上清をカラムに添加し、同じ操作を繰り返す。 |
|
| 5. | メンブレンの洗浄 | | | Buffer B4*3 600 μlをカラムに添加し、11,000×gで1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、再び同じCollection Tubeにセットする。
(オプション）
プラスミドの宿主にヌクレアーゼ活性をもつ大腸菌（例：HB101など）を使用している場合、Buffer A4での洗浄ステップの前に以下のステップを追加する。
あらかじめ50℃に温めたBuffer AW 500 μlを添加し、11,000×gで1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、カラムを同じCollection Tubeにセットする。 |
|
| 6. | メンブレンの乾燥 |  |  | 11,000×gで2分間遠心する。Collection Tubeからカラムをはずす。 |
|
| 7. | DNAの溶出 |  |  | カラムをマイクロチューブ（1.5 ml：各自で用意）にセットする。
Buffer AE 50 μlを添加し、室温で1分間インキュベートした後、11,000×gで1分間遠心する。
溶出液をプラスミド溶液として保存する。
Buffer AEの組成：5 mM Tris-HCl、pH8.5 |
|
