クローニングのためのインサート調製の効率化：Application

ヒト心臓由来のtotal RNAから、PrimeScript II 1st strand cDNA Synthesis Kit（製品コード 6210A）を用いて逆転写反応を行い、cDNAを調製した。このcDNA 2 μl（total RNA 500 ng相当）を鋳型として、20種類の遺伝子のORF全長を、pCMV-HA-CベクターにクローニングするためのIn-Fusion用プライマーとTks Gflexを用いてPCRを行った。 Tks Gflexを使用することで、20種類すべてのターゲットORFを標準条件で増幅することができた。

どんなターゲットでもTks Gflexにお任せください。クローニングの大幅な効率アップに役立ちます。

　　　　　　　　　　　　M：250 bp DNA Ladder M2：λ-Hind III digest

ターゲット遺伝子リスト

レーンNo.	遺伝子名	鎖長	GC	レーンNo.	遺伝子名	鎖長	GC
レーンNo.	遺伝子名	(bp)	(％)	レーンNo.	遺伝子名	(bp)	(％)
1	PLN	159	39.6	11	KCNQ1	2,031	64.2
2	NKX2-5	339	68.4	12	DTNA	2,232	49.5
3	FABP3	402	50	13	JUP	2,238	62.2
4	MYL2	501	50.4	14	CEP85L	2,418	42
5	CMA1	744	52.2	15	PKP2	2,514	53.3
6	CITED2	813	63.8	16	KCNH2	3,480	65.9
7	GATA4	1,329	68.8	17	JAG1	3,657	54
8	MEF2C	1,392	49.4	18	MYH6	5,820	57.6
9	CD36	1,419	39.5	19	SCN5A	6,048	57.3
10	ADRB1	1,434	71.8	20	RYR2	14,904	46.2

Tks GflexのPCR条件：

	94℃ 1 min. 　↓
	98℃ 10 sec. 55℃ or 60℃ 15 sec. 68℃ 30 sec./kb		35 cycles

上記はすべて弊社取得データです。

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Tks Gflex™ DNA Polymerase

クローニングのためのインサート調製の効率化