10 μgのCleavage Control Fusion Proteinをプロトコールの「溶液での切断」に従って、4℃で16時間で反応を行った。反応後、TALON Metal Affinity ResinおよびTALON 2 ml Disposable Gravity Columnを用いて精製を行った。TALON Resinのフロースルー、Wash画分、溶出画分のSDS-PAGEを行い、GSTと、HNタグ融合TFおよびHRV 3C Proteaseの分離を確認した。
12% SDS-PAGE LabSafe GEL Blue(製品コード 786-35)で染色
M | :Protein Molecular Weight Marker(Broad)(製品コード 3452) |
Lane 1 | :Cleavage Control Fusion Protein(76 kDa) |
Lane 2 | :HRV 3C Proteaseで切断後の反応液;GST(24 kDa)、HN 融合TF(52 kDa)、HRV 3C |
| Protease(22 kDa)が含まれる。 |
Lane 3 | :TALON Resinフロースルー |
Lane 4 | :TALON Resin Wash画分;GSTが含まれる。 |
Lane 5 - 8 | :TALON Resin溶出画分;HNタグ融合TFおよびHRV 3C Proteaseが含まれる。 |
Cleavage Control Fusion Protein の構造