| 試薬の準備 |
| |
rDNase溶液＊1，Buffer RB3＊2が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認する。
|
|
| サンプルの準備 |
 |
200 μlの新鮮な血液サンプル（抗凝固剤が添加されているものが望ましい）を用意する＊3。
|
|
| 1. サンプルの溶解 |
 |
添付の2 ml Collection tubeに血液サンプル200 μlとBuffer DL 200 μlを加えて混合する。蓋に血液が付着するようならスピンダウンで落とす。
Proteinase K 5 μlをさらに加えて、室温で3～15分激しく振盪する。
スピンダウンにより蓋に付着した血液を落とす（沈殿を生じさせないように注意する）。
|
|
| 2. エタノールの添加 |
 |
70%エタノール200 μlを添加し、よく混合する。
スピンダウンにより蓋に付着した血液を落とす（沈殿を生じさせないように注意する）。
|
|
| 3. カラムへの吸着 |
 |
NucleoSpin RNA Blood Column（水色のリング）を用意する。
2の溶液をカラムに添加し、11,000×g、30秒間遠心する。
カラムを新しいCollection Tube（2 ml）にセットする。
|  |
|
| 4. メンブレンの脱塩 |
|
MDB 350 μlをカラムに添加し、11,000×g、30秒間遠心する。
|
|
| 5. DNase処理 |
 |
rDNase溶液 95 μlをシリカメンブレンの中央へ直接添加し、室温（18～25℃）で15分間インキュベートする。
|
|
| 6. メンブレンの洗浄 |
|
1回目の洗浄
Buffer RB2 200 μlをカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心する。
カラムを新しいCollection Tube（2 ml）にセットする。
| |
2回目の洗浄
Buffer RB3＊2 600 μlをカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心する。
ろ液を捨てた後、再び同じCollection Tubeにセットする。
| |
3回目の洗浄
Buffer RB3＊2 250 μlをカラムに添加し、11,000×gで2分間遠心する。
カラムを新しいCollection Tube（1.5 ml）にセットする。
| |
|
| 7. RNAの溶出 |
 |
RNase-free H2O 60 μlをカラムに加え、11,000×gで30秒間遠心する。
溶出したRNA溶液は、－20℃または－70℃で保存する。
| |
|
