RetroNectin®コートプレートの作製
- RetroNectin溶液を融解し均一になるように混合する（ボルテックスによる撹拌は避けてください）。使用時に滅菌済みPBSで適当な濃度（20～100 μg/ml）＊1となるように希釈する。
*1 フィルターに吸着する可能性があるため、希釈後のRetroNectin溶液はフィルターろ過しない。
- クリーンベンチ内で、 0.25～0.5 ml/cm2（プレート底面が溶液で浸る程度）となるようにRetroNectin希釈液をプレート＊2 に加えてプレート全底面に広げ、室温で2時間または4℃で一晩放置する。24ウェルプレートの場合には1ウェルあたり0.5 ml、6ウェルプレートの場合には1ウェルあたり2 mlのRetroNectin希釈液を加える。
*2 プレートは必ずノントリートメントタイプのものを使用する。
- RetroNectin希釈液を除き、適当量の2% BSA/PBS溶液を加えてブロッキングを行う。室温で30分間放置する＊3。24ウェルプレートの場合は0.5 ml／ウェル、6ウェルプレートの場合は2 ml／ウェルのブロッキング液を加える。
*3 すぐに使用する場合は、 2% BSA/PBS溶液によるブロッキング操作は省くことができる。この場合、ステップ4のPBSまたはHBSS/Hepesによる洗浄を2回繰り返す。
- 2% BSA/PBS溶液を除き、適当量のPBSまたはHBSS/Hepesで一度洗浄し、それらを除去した後、プレートを保存する。このプレートをRetroNectinコートプレート＊4とする。
*4 2% BSA/PBS溶液によるブロッキング操作を行った場合は、容器のふたをパラフィルム等でシールし、4℃で1週間の保存が可能である。
