レンチウイルスベクターによる遺伝子導入 ＜製品選択ガイド＞

＜レンチウイルスベクターの調製＞

HEK293T細胞（60 mm dish, 80％ confluency）に、Venus発現レンチウイルスベクタープラスミドとパッケージングプラスミドをコトランスフェクトした。
Venus発現レンチウイルスベクタープラスミドは、CSII-CMV-Venus（RIKEN BRC DNA BANKより入手、Cat. RDB05553）を使用した。
パッケージングプラスミドは、Lentiviral High Titer Packaging Mix（製品コード 6194）を使用し、比較対照として普段使用しているパッケージングプラスミドを用いた。
また、トランスフェクションには、A社のPEI試薬を使用した。
コトランスフェクションは、以下の量比で各試薬(1)～(4)を混合し、室温で15分静置後に行った。

(1)	Opti-MEM	500 μl
(2)	CSII-CMV-Venus	3 μg
(3)	Lentiviral High Titer Packaging Mix	3.5μl
	or 別のパッケージングプラスミド	or 各1.5 μg
(4)	PEI試薬	20 μg

6時間後に培地交換し48時間培養後、培養上清を回収した。

＜標的細胞への感染＞

CHO-K1細胞（12 well, 60％ confluency）に、ウイルス液500 μl、フレッシュなCHO-K1用メディウム500 μl、ポリブレン8 μg/mlで感染させ、24時間後に蛍光顕微鏡を用いてVenusの蛍光を観察した。

図1. 普段使用しているパッケージングプラスミドを用いた方法

図2. Lentiviral High Titer Packaging Mixを用いた方法

※露光時間などを全て同条件で撮影した蛍光写真と明視野写真をmerge

Lentiviral High Titer Packaging Mixを用いるとより感染率の上昇が確認された。