クローニング

In-Fusion HD Cloning Kit w/NucleoSpin（製品コード 639639）を用いて、インバースPCRで増幅したベクター2.7 kbに0.5 kbから15 kbのPCR増幅断片を挿入するIn-Fusion反応を行った。各DNA断片のPCR増幅にはPrimeSTAR GXL DNA Polymerase（製品コード R050A）を使用し、増幅産物をNucleoSpinカラムで精製後、ベクター50 ngとインサートDNA 50 ngをIn-Fusion反応に使用した。形質転換にはE. coli HST08 Premium Competent Cells（製品コード 9128）を使用した。

0.5 kbから15 kbのインサートサイズと形質転換体の数を以下の表に示した。ベクター50 ngに対しインサートを50 ng反応させることで15 kbまでのインサートを含む形質転換体を十分な効率で取得することができた。

Kit	Vector 50 ng	Insert 50 ng	Colonies plating 1/5	Insert check
In-Fusion HD Cloning Kit	pUC19	0.5K	17,920	10/10
		1K	20,800	10/10
		2K	12,960	10/10
		4K	6,400	10/10
		6K	2,256	7/10
		8K	2,528	9/10
		10K	808	7/10
		12K	872	10/10
		15K	904	10/10