In-Fusion反応におけるインサートサイズとクローニング効率
方法
In-Fusion HD Cloning Kit w/NucleoSpin（製品コード 639639）を用いて、インバースPCRで増幅したベクター2.7 kbに0.5 kbから15 kbのPCR増幅断片を挿入するIn-Fusion反応を行った。各DNA断片のPCR増幅にはPrimeSTAR GXL DNA Polymerase（製品コード R050A）を使用し、増幅産物をNucleoSpinカラムで精製後、ベクター50 ngとインサートDNA 50 ngをIn-Fusion反応に使用した。形質転換にはE. coli HST08 Premium Competent Cells（製品コード 9128）を使用した。
PrimeSTAR GXLで増幅した精製済PCR産物（50 ng）
結果
0.5 kbから15 kbのインサートサイズと形質転換体の数を以下の表に示した。ベクター50 ngに対しインサートを50 ng反応させることで15 kbまでのインサートを含む形質転換体を十分な効率で取得することができた。
| Kit | Vector 50 ng | Insert 50 ng | Colonies plating 1/5 | Insert check |
|---|---|---|---|---|
| In-Fusion HD Cloning Kit | pUC19 | 0.5K | 17,920 | 10/10 |
| 1K | 20,800 | 10/10 | ||
| 2K | 12,960 | 10/10 | ||
| 4K | 6,400 | 10/10 | ||
| 6K | 2,256 | 7/10 | ||
| 8K | 2,528 | 9/10 | ||
| 10K | 808 | 7/10 | ||
| 12K | 872 | 10/10 | ||
| 15K | 904 | 10/10 |
