NucleoBond^® RNA Soil

4本のMN Bead Tubes Type Aの1 mlの目盛り線まで、土壌サンプルを入れる^＊2。

各Bead Tubeに800 μlのBuffer E1を加える。
（オプション：各TubeへさらにBuffer OPT 100 μlを加える。Buffer OPTの添加により、無機質の多い土壌ではRNA回収量の増加が期待できるが、有機物の多い土壌では阻害物の混入が多くなる）
さらに100 μlのフェノール：クロロホルム：イソアミルアルコール溶液（添加前によく混合しておく）を加えて、2秒間vortexで混合する。

Bead TubeをVortex mixer上のMN Bead Tube Holderにセットし、室温で5分間最高速度で振盪する^＊3。

13,000×g、2分間遠心する。
4本のBead Tubeより上清を集め、新しい15 mlチューブ（各自で用意）に移す。
抽出液のおおよその液量を計測する。

抽出液の容量に対して、1/8の液量のBuffer E2を加える。Vortexで5秒間混合する。
室温で2分間静置後、4,500×g、2分間遠心する。

NucleoBond RNA Columnを、Buffer EQU 12 mlで平衡化する。
図に示すように、カラムの縁に沿ってバッファーを注ぐ。液を自然落下させてカラムを空にする。

5. の上清をフィルターの中央に加える。
液を自然落下させてカラムを空にする。このろ液にはフェノール、クロロホルムが含まれるので、適切に処理する。

Buffer E3　6 mlでフィルターとカラムを洗浄する。
図に示すようにカラムの縁に沿ってバッファーを注ぐ。自然落下させてカラムを空にしたのちフィルターを破棄する。

Buffer E4　8 mlでカラムを洗浄する。

Buffer ERNA 5 mlでRNAを溶出する。
溶出液を50 ml遠心チューブ（各自で用意）に集める^＊4。

イソプロパノール 3.5 ml（各自で用意）を加えて、vortexで5秒間混合する。
50 mlチューブにセットしたNucleoSpin Finisher Columnに移す。

NucleoSpin Finisher Columnを4,500×g、2分間遠心する。ろ液を捨てる。

NucleoSpin Finisher Columnの中央にBuffer E5 1mlを加える。
4,500×g、2分間遠心する。

NucleoSpin Finisher Columnを新たな50 mlチューブに移し、RNase-free H₂O 100 μlを加え、4,500×g、2分間遠心して核酸を溶出させる。