試薬の準備 | Buffer WB2*1が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認する。 | |||||||
1. | サンプルの溶解 | 試料にBuffer LB1 100 μlを添加し、均一にホモジナイズして溶解する。試料はなるべく細かく破砕し、完全に溶解させることが望ましい。還元剤の添加は必要ない。 Buffer LB2 100 μlを加えて混合する。 |
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2. | ゲノムDNAの除去と ライセートのろ過 |
NucleoSpin gDNA Removal Column XS(黄色のリング)を2 ml Collection tubeにセットする。1.のライセートをカラムに添加し、100×g、2分間、引き続き11,000×g、10秒間遠心する。カラムに液が残っている場合は再度遠心し、液を完全にろ過する。
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3. | 吸着条件の調整 | カラムを取り除き、ろ液にBinding Solution BSXS 150 μlを添加し、よく混合する。 |
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4. | カラムへの吸着 | NucleoSpin RNA Plus XS Column(水色のリング)を用意する。 3.の溶液をカラムに添加し、300×g、1分間、引き続き11,000×g、10秒間遠心する。ろ液を捨てた後、再び同じCollection Tubeにカラムをセットする。あるいは、新しいCollection Tube(2 ml:各自で用意)にセットしてもよい。 |
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5. | メンブレンの洗浄 |
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6. | RNAの溶出 |
カラムをマイクロチューブ(1.5 ml:各自で用意)にセットする。 RNase-free H2O*2 10~20 μlをカラムに加え、11,000×gで1分間遠心する。溶出したRNA溶液は、-20℃または-70℃で保存する。 |