AAVpro^® Cell & Sup. Purification Kit Maxi (All Serotypes)

データご提供：Y大学M先生

実験概要

CAG-tdTomato配列を持つAAV1もしくはAAV9を作製し、ウイルス作製の効率、作製したウイルスが293T細胞への感染能を保持しているかを調べた。

結果

10 cm dish 2枚分^＊のHEK293T細胞から回収したAAV1, AAV9をAAVpro Cell ＆ Sup. Purification Kit Maxi (All Serotypes)で精製し、A社のqPCR AAV Titer Kitでウイルスタイターを計測したところ、AAV1，1.198×10¹⁰ copies/ml、AAV9，6.36×10¹¹ copies/mlのウイルス（各150 µl）が得られた。それらのウイルスをAAV1，1×10⁴ VP/cell, AAV9，2×10⁵ VP/cellの濃度で1×10⁵ cells/wellのHEK293T細胞に振りかけたところ、どちらのウイルスも感染能が確認できた。
＊ 標準プロトコールはT225フラスコ5本から精製します。


AAVのセロタイプ：AAV1, AAV9
ウイルス産生用細胞：HEK293T細胞
感染細胞：HEK293T細胞

AAVpro Cell ＆ Sup. Purification Kitを使ったことがないユーザー様に一言お願いします。

精製には半日～1日かかったが、プロトコルには特に戸惑うところもなく、初心者でもウイルス調製ができた。上清か細胞どちらか単独からのAAV精製がうまくいかない場合は試してみても良いかと思います。