VCEと2’-O-MTaseを用いたRNAの5’-Cap修飾（Cap-0 / Cap-1 RNA調製）
Takara IVTpro（製品コード 6144）での共転写cappingとは異なる、“Post-transcriptional capping”に関連する調製手法です。
IVTなどで合成されたRNAを基質として、Cap-0 RNAやCap-1 RNAを調製することが可能です。
IVTなどで合成されたRNAを基質として、Cap-0 RNAやCap-1 RNAを調製することが可能です。
AdoMet（SAM）：S-adenosyl methionine
AdoHcy（SAH）：S-adenosyl homocysteine
AdoHcy（SAH）：S-adenosyl homocysteine
反応工程
VCE（Vaccinia Capping Enzyme）は、D1およびD2と呼ばれるサブユニットから構成される酵素複合体で、5’-3リン酸もしくは5’-2リン酸タイプのRNAを基質として3つの反応工程を媒介します。
- RNA 5’-triphosphatase（RTPase）として、5ʹ末端のリン酸基を1つ除去
- Guanylyltransferase（GTase）として、5’末端にG(5’)-pの付与
- (guanine-N7)-methyltransferase（N7MTase）として、5’末端のG(5’)塩基の7位のメチル化
※Uncapped RNAのCap-0 RNA（m7G-capped RNA）への変換 - Cap-0 RNAの1st nucleotideの2’-OH基のメチル化
※Cap-0 RNAのCap-1 RNAへの変換
2’-O-MTase（mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase）は、Cap-0 RNA（m7G-capped RNA）を基質として、RNAの1番目のヌクレオチドの2’-O部位を特異的にメチル化し、Cap 1構造を付与します。
