下水疫学調査（下水サーベイランス）用リアルタイムPCRキット

【対象製品】
Norovirus Detection RT-qPCR Kit for Wastewater（製品コード RC387A）

【概要】
山梨県内の下水処理場において採取した、ノロウイルスGIおよびGII陽性の下水流入水9サンプルについて、ノロウイルスGIおよびGIIの検出を行った。反応はN=2で実施した。

【結果】
全てのサンプルからノロウイルスGIおよびGIIが検出された。

図1．リアルタイムRT-qPCRによるノロウイルスGIおよびGII検出結果（Ct値および増幅曲線）

【方法】
ウイルスの濃縮：PEG沈殿法

1. 40 mlの下水サンプルにPEG8000を4.0 gおよびNaClを0.94 g添加し、混合する。
2. 12,000×g　99分　4℃の条件で遠心する。
3. 上清を除去する。
4. 12,000×g　5分　4℃の条件で遠心する。
5. 上清を除去する。
6. 800 μlの滅菌水で沈殿物を懸濁する。

※従来法^＊の4℃での一晩の振とうおよびその後の遠心の工程を、手順2～5にて代用することにより作業時間を短縮しました。
＊公益社団法人日本水環境学会COVID-19タスクフォース発行「下水中の新型コロナウイルス遺伝子検出マニュアル」（2021年3月）

核酸精製
上記の方法で得られたウイルス濃縮液から分取した140 μlについて、核酸抽出キットのプロトコールに従って精製を行い、RNA抽出液60 μlを回収した。

• リアルタイムPCR反応液組成：取扱説明書記載の通り。
• リアルタイムPCR装置：Thermal Cycler Dice Real Time System III (Cy5) with PC（製品コード TP990）
• リアルタイムPCR条件：
  

  25℃ 42℃ 95℃ 95℃ 56℃

  10 min. 5 min. 30 sec. 5 sec. 30 sec.

  45 cycles

※本手順およびデータは、弊社との共同研究を通じて、国立大学法人山梨大学国際流域環境研究センター 原本英司教授よりご提供いただきました。