PrimeSTAR® LongSeq DNA Polymerase

GC・ATリッチターゲットの長鎖マルチプレックスPCR

ヒトゲノムDNAを鋳型とする2対のプライマー( Set A:7 kb(GC:68%)、21 kb( AT:65%)、Set B:8 kb( AT:66%)、20 kb( GC:65%))を用いてマルチプレックスPCRを行いました。50 μl反応系に鋳型とする100 ngのヒトゲノムDNAを添加し、各プライマーは最終濃度0.2 μMで使用しました。増幅確認には、4200 TapeStation System(Agilent)を用いて解析しました。その結果、PrimeSTAR LongSeq DNA Polymerase(製品コード R055A/B)では、非特異的な増幅を抑えた長鎖マルチプレックス増幅が可能であることが示されました。

鋳型:ヒトゲノムDNA(100 ng/50 µl反応系)
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Set A
1.Multiplex PCR7 kb (GC:68%)、21 kb (AT:65%)
2.Singleplex PCR7 kb (GC:68%)
3.Singleplex PCR21 kb (AT:65%)

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Set B
4.Multiplex PCR8 kb (AT:66%)、20 kb (GC:65%)
5.Singleplex PCR20 kb (GC:65%)
6.Singleplex PCR8 kb (AT:66%)
M.Ladder

 
PCR条件:
94℃1 min.
98℃10 sec.
 
35 cycles
68℃ 30 sec./kb
Clontech PCR Thermal Cycler GP(製品コード WN400)使用

  PrimeSTAR® LongSeq DNA Polymerase