NucleoSpin® Food

食品からのゲノムDNA精製プロトコール

NucleoSpin Food（製品コード 740945.10, 740945.50, 740945.250）

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試薬の準備
　 Buffer C5＊1, Proteinase K溶液＊2が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認する。
1．サンプルの破砕
食品サンプル 約200 mgを市販のホモジナイザーなどで破砕する＊3。
2. サンプルの溶解
破砕したサンプルをCollection tube（2 ml）に移し、65℃に温めたBuffer CF 550 μｌを加えて、注意深く15秒間混合する＊4。
Proteinase K溶液を10 μｌ加えて、さらに2～3秒間混合する。
65℃で30分間保温した後、10,000×g以上、10分間遠心する。RNAを除きたい場合は、ここでRNase処理を行う＊5。
3. Bufferの添加
上清を別のマイクロチューブ（各自で用意）に移し、等量のエタノールと等量のBuffer C4を加えて、vortexで30秒間混合する（サンプル：エタノール：Buffer C4＝1：1：1）。
4. カラムへの吸着
NucleoSpin Food ColumnをCollection tube（2 ml）にセットする。
3．の溶液700 μｌをカラムに加えて、11,000×g、1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
上記の作業を繰り返し、3．の溶液を全てカラムに添加する。
5. メンブレンの洗浄
1回目の洗浄
Buffer CQW 400 μlをカラムに添加し、11,000×gで1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
2回目の洗浄
Buffer C5＊1 700 μlをカラムに添加し、11,000×gで1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
3回目の洗浄
Buffer C5＊1 200 μlをカラムに添加し、11,000×gで2分間遠心してBuffer C5をカラムから完全に除く。
6. DNAの溶出
カラムを新しいマイクロチューブ（各自で用意）にセットする。
70℃に温めたBuffer CE 100 μl＊6を添加し、室温で5分間インキュベートする。
11,000×gで1分間遠心し、DNAを溶出させる。
*1 Buffer C5の調製法
Buffer C5（Concentrate）に4倍量の96～100％エタノールを添加して、よく混合する。Buffer C5は室温で1年間安定である。
*2 Proteinase K溶液の調製法（製品コード 740945.10（10回用）の場合）
Proteinase K（凍結乾燥品）のチューブに、添付のProteinase Buffer PB 120 μlを添加して完全に溶解させる。
Proteinase K溶液は－20℃で6ヵ月安定である。
*3 食品サンプルの状態によって処理方法が異なるので、サンプルに応じた方法を用いる（英文説明書参照）。
*4 Buffer量が不足していて溶解が十分にできない場合は、Buffer CFを更に加えて完全に懸濁させる（この際にはProteinase K溶液＊3の添加量もBuffer CFに合わせて増やす）。
*5 RNAを完全に除去したい場合には、サンプルの溶解のステップで65℃ 30分間の保温後、20 mg/ml RNase A溶液を10 μl（Buffer CFが550 μlの場合）加えて、室温で30分間静置し、RNAを分解する。RNase A（凍結乾燥品）(製品コード 740505.50、740505)が使用可能。
*6 DNAの収量や濃度を上げたい場合は、溶出液量も変更することが可能である（英文説明書参照）。
また、Buffer CEの代わりにTE Bufferや水で溶出することも可能である。水で溶出する場合は、pH8～8.5に調整して用いる（英文説明書参照）。


＜注意＞
使用時には、詳細は必ず添付の英文説明書をご確認ください。

*2 は、製品コード 740945.10（10回用）の場合の調製法である。
製品コード 740945.50（50回用）、740945.250（250回用）の場合の調製法は英文説明書を参照すること。

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