酵母からのDNA精製プロトコール
NucleoSpin DNA Yeast（製品コード 740236.10/.50）
| 試薬の調製 | Buffer B5＊1が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認する。 | |
| 1. | サンプルの準備 |
 試料（～100 mg湿重量）をマイクロチューブ（1.5 ml：各自で用意）に回収する。 Buffer BE 100 μlを加えて懸濁する。 |
|---|---|---|
| 2. | サンプルの溶解 |
  1の溶液をMN Bead Tube Type Cに移す。 Buffer MG 40 μlを添加し、さらにProteinase K 10 μlを加える。 Bead TubeをMN Bead Tube Holderにセットし、Vortex-Genie 2上で約15～20分間フルスピードで振盪して、試料を破砕する＊2。 Bead Tubeを11,000×g、30秒間遠心する。 |
| 3. | Bufferの添加 |
Buffer MG 600 μlをBead Tubeに加えて、vortexで3秒間混合する。
Bead Tubeを11,000×g、30秒間遠心する。 |
| 4. | カラムへの吸着 |
 NucleoSpin DNA Yeast Columnを2 ml Collection Tubeにセットする。
3の上清650 μlをカラムに添加し、11,000×g、30秒間遠心する＊3。 ろ液を捨てた後、新しい2 ml Collection Tubeにカラムをセットする。 |
| 5. | メンブレンの洗浄 |
1回目の洗浄
Buffer BW 500 μlをカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心する。 ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。 2回目の洗浄 Buffer B5 500 μl をカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心する。 ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。 |
| 6. | メンブレンの乾燥 |
 カラムをさらに11,000×gで30秒間遠心する。
カラムをCollection Tubeのろ液に触れないよう取り出す。 |
| 7. | DNAの溶出 |
 カラムをマイクロチューブ（1.5 ml：各自で用意）にセットする。
Buffer BE 100 μlを添加し、蓋を閉めて、1分間室温で静置する。 11,000×gで30秒間遠心し、DNAを溶出する。 |
*1 Buffer B5の調製法
Wash Buffer B5 (Concentrate) 6 mlに96～100％エタノール 24 mlを添加する。
*2 試料の破砕には市販の振盪破砕機なども使用できる。使用条件は各機器によって異なるため、個別に条件検討が必要となる。英文説明書に参考条件の記載がある。
*3 Beadより下の溶液はなるべくとらないようにする。
＜注意＞
使用時には、詳細は必ず添付の英文説明書を確認すること。
