Alkaline Phosphatase (Shrimp) (SAP)

エッペンドルフチューブ内で以下の反応液を調製し、全量を50 μlとする。

DNA fragment in TE Buffer		1～10 pmol
Shrimp Alkaline Phosphatase (1 U/μl)		1～5 μl
10×SAP Buffer*1		5 μl
滅菌精製水		up to 50 μl

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37℃で15～30分間インキュベートする。
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65℃で15分間インキュベートする。^*2（熱処理による失活）
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2.5 μlの3 M NaClを添加する。(終濃度150 mM)
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エタノール沈殿（2.5倍の冷エタノールを加え、-20℃で30～60分間保冷後、遠心分離）
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200 μlの70％冷エタノールで洗浄後、乾燥
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TE Buffer（20 μl以下）に溶解

*1　10×SAP Buffer
　 　500 mM Tris-HCl (pH9.0), 50 mM MgCl₂
*2　大腸菌由来の酵素とは異なり、65℃で15分間の熱処理により完全に不可逆的に失活する。

（注意）	平滑末端や3'突出末端の脱リン酸化には、BAP（Bacterial Alkaline Phosphatase）を用いた55℃～60℃での反応をお勧めする。