pHEK293 Ultra Expression Vector

接着性HEK293T細胞
あらかじめ12ウェル細胞培養用プレートに培養しておいたHEK293T/17細胞に、TransIT-293 Transfection Reagent（製品コード MIR2704～2706）を使用して、キットのプロトコールに従ってトランスフェクションを行った。各実験で使用したプラスミドを表2に示した。

浮遊性HEK293細胞
あらかじめ125 ml三角フラスコに培養しておいた浮遊性HEK293細胞（Free Style 293-F cells、Thermo Fisher Scientific社製）に、キットのプロトコールに従ってトランスフェクションを行った。各実験で使用したプラスミドを表2に示した。

表2

	細胞	G-CSF発現ベクター		pHEK293 Enhancer Vector
		プラスミドの種類	プラスミド量 （μg）	プラスミド量 （μg）
1 2 3 4 5	接着性 HEK293T細胞	pBApo-CMV/G-CSF Vector I/G-CSF Vector II/G-CSF Vector II/G-CSF Negative Control	1 1 1 1 -	- - 0.008 0.2 -
6 7 8 9 10	浮遊性 HEK293細胞	pBApo-CMV/G-CSF Vector I/G-CSF Vector II/G-CSF Vector II/G-CSF Negative Control	30 30 30 30 -	- - 0.24 6 -

トランスフェクションから2、5、7日後に培養上清を回収し、Human G-CSF Assay Kit（ IBL社Code. 27131）を用いてG-CSF定量を行った。結果を図9に示した。その結果、本製品を使用することで、一般的なCMVプロモータを利用した発現ベクター（pBApo-CMV DNA）と比較して、3～5倍のG-CSF発現量の向上が認められた。



図9．G-CSFの定量