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In-Fusion
®
HD Cloning Kit
In-Fusion反応におけるインサートサイズとクローニング効率
In-Fusion
®
HD Cloning Kit
In-Fusion反応におけるインサートサイズとクローニング効率
方法
In-Fusion HD Cloning Kit w/NucleoSpin(製品コード 639639)
を用いて、インバースPCRで増幅したベクター2.7 kbに0.5 kbから15 kbのPCR増幅断片を挿入するIn-Fusion反応を行った。各DNA断片のPCR増幅には
PrimeSTAR GXL DNA Polymerase(製品コード R050A)
を使用し、増幅産物をNucleoSpinカラムで精製後、ベクター50 ngとインサートDNA 50 ngをIn-Fusion反応に使用した。形質転換には
E. coli
HST08 Premium Competent Cells(製品コード 9128)
を使用した。
PrimeSTAR GXLで増幅した精製済PCR産物(50 ng)
結果
0.5 kbから15 kbのインサートサイズと形質転換体の数を以下の表に示した。ベクター50 ngに対しインサートを50 ng反応させることで15 kbまでのインサートを含む形質転換体を十分な効率で取得することができた。
Kit
Vector 50 ng
Insert 50 ng
Colonies plating 1/5
Insert check
In-Fusion HD Cloning Kit
pUC19
0.5K
17,920
10/10
1K
20,800
10/10
2K
12,960
10/10
4K
6,400
10/10
6K
2,256
7/10
8K
2,528
9/10
10K
808
7/10
12K
872
10/10
15K
904
10/10
In-Fusion
®
HD Cloning Kit