アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクター作製

タカラバイオでは脳指向性の高いAAVベクター「CereAAV」を開発し、マウスおよびマーモセットの脳、マウス網膜内の細胞に対する高い遺伝子導入効率を確認しました（詳細はこちら）。今回、遺伝子導入評価としてバーコードライブラリー技術を用いてCereAAVのカニクイザルにおける生体内分布を評価しました。

【実験方法】
AAVバーコードライブラリーの調製
AcGFP遺伝子下流の非翻訳領域にバーコード配列を挿入したAAVゲノムプラスミドを作製した。293T細胞に各種プラスミドベクターを共導入し、AAVベクターを産生させてアフィニティクロマトグラフィーおよびCsCl超遠心によりAAVバーコードライブラリーを調製した。

AAVベクターのカニクイザルへの伏在静脈投与
各AAVベクター（AAV9、AAV2、CereAAV）をカニクイザルに伏在静脈投与した（3.2×10¹³ vg/kg）。4週間後に各組織を採取し、各組織中のRNA由来のバーコード配列を次世代シーケンス（NGS）解析し、遺伝子導入効率を評価した。


【結果】
CereAAVはAAV2およびAAV9に比べて脳および脊椎で高い遺伝子発現を示した。

（各組織中のRNA由来バーコード配列の出現頻度をInputにより標準化することでEnrichmentを算出した。図は、AAV9を1とした時のCereAAVおよびAAV2の遺伝子発現を示す。）

タカラバイオでは、CereAAVシリーズ (CereAAVおよびCereAAV改変体) を用いたアデノ随伴ウイルス（AAV）ベクター作製受託を承っております。詳細については、お問い合わせフォームよりご連絡ください。
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