下水疫学調査（下水サーベイランス）用リアルタイムPCRキット

【対象製品】
Influenza virus Detection RT-qPCR Kit for Wastewater（製品コード RC382A）

【概要】
Positive Control DNA（FluA/FluB）を1反応当たり5×10⁴～1×10⁰コピー添加し、シングルプレックスおよびマルチプレックスにより、インフルエンザウイルスA型（FluA）およびインフルエンザウイルスB型（FluB）の検出をおこないました。反応はN=2で実施しました。

【結果】
シングルプレックス、マルチプレックスのいずれにおいても、FluAは1反応当たり5コピー、FluBは1反応当たり20コピー以上においてN=2でCt値が算出されました。ただし、マルチプレックスではFluAにおいて低コピーでの蛍光値の低下が確認されました。

【考察】
ターゲット濃度が低いサンプルにおいて、マルチプレックス検出による蛍光値の低下がCt値算出の有無に影響を与える可能性が考えられます。

【方法】

• リアルタイムPCR反応組成：
  • シングルプレックス用：取扱説明書記載の通り。
  • マルチプレックス用：

    試薬		使用量（1反応当たり）
    RT-qPCR Mix 1 w/UNG	2×	12.5 μl
    FluA Primer/Probe	25×	1.0 μl
    FluB Primer/Probe	25×	1.0 μl
    RNase Free H2O		5.5 μl
    Template		5.0 μl
    Total		25.0 μl



• リアルタイムPCR装置：Thermal Cycler Dice Real Time System III (Cy5) with PC（製品コード TP990）


• リアルタイムPCR条件：
  

  25℃ 42℃ 95℃ 95℃ 56℃

  10 min. 5 min. 30 sec. 5 sec. 30 sec.

  45 cycles

※本データは、弊社との共同研究を通じて、国立大学法人山梨大学国際流域環境研究センター原本英司教授よりご提供いただきました。