BcaBEST^® DNA Polymerase ver.2.0

BcaBEST DNA Polymerase ver.2.0は、Bacillus caldotenaxを由来とする5’→3’エキソヌクレアーゼ活性欠損型DNAポリメラーゼ（BcaBEST DNA Polymerase）のバージョンアップ製品です。従来の高い鎖置換活性に加え、変異導入によりDNAポリメラーゼ活性と逆転写活性が増強されています。そのため、本酵素を用いた等温増幅では、より短時間での微量核酸の増幅が可能となっています。本製品には、dNTPを含むLAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）用の反応バッファーが含まれ、ターゲット遺伝子の検出系構築に使用できます。

BcaBEST DNA Polymerase ver.2.0は逆転写酵素活性を有しますが、RNAを鋳型とするReverse Transcription LAMP（RT-LAMP）を実施する際には、反応液中にReverse Transcriptase XL (AMV)（例：製品コード 2630Aなど）を添加することをお勧めします（使用例参照）。

蛍光でのReal-Time LAMP/Real-Time RT-LAMPを実施する際には、TB Green Solution（製品コード 9300A）をご利用ください。使用例を記載したデータシートもご用意しています。

BcaBEST DNA Polymerase ver.2.0（製品コード RR380A）

BcaBEST DNA Polymerase ver.2.0	200 μl ×1
2×BcaBEST Buffer	1.25 ml ×2

－20℃

8 U/μl

Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for BcaBEST DNA Polymerase ver.2.0

質量：約68 kDa

65℃において30分間に210 nmolのdNTPを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素量を1 Uとします。

25 mM		TAPS (pH9.3, 25℃)
50 mM		KCl
2 mM		MgCl2
0.1 mM		DTT
各200 μM		dATP・dGTP・dCTP
100 μM		dTTP
10 μCi		[3H]-dTTP
0.25 mg/ml		活性化サケ精子 DNA

60～65℃で30分間インキュベーションする。^*4

*1 FIP/BIP primers: 16 μM、F3/B3 primers: 2 μM、LoopF/B primers: 8 μM
*1、2、4 至適なプライマー濃度、酵素濃度、反応温度・時間は、ターゲット遺伝子やプライマー配列によって異なるので適宜調整する。酵素濃度が高い場合、検出（増幅）時間は短縮されるものの非特異増幅のリスクが高まるので、鋳型無しのコントロール反応を行い、特異性に問題がないかを確認してください。
*3 反応液準備中での非特異反応を避けるため、サンプルは最後に添加する。ターゲットがRNAである場合は、Reverse Transcriptase XL (AMV)（5 U/μl）を最終濃度が0.04 U/μlになるように添加してください。

注: 検出においては、変色指示薬を用いた肉眼での確認から蛍光物質を用いたリアルタイム装置での検出まで、様々な方法を用いることができます。目的に応じた検出方法をご使用ください。