T4 DNA Polymerase

Cloned
反応用バッファー添付
製品コード メーカー
略称
製品名 容量 価格(税別)
キャンペーン価格
特記事項 説明書、CoA
データシート
ベクター情報
参考資料 カート
Takara Code
2040A

TKR

タカラバイオ(株)
T4 DNA Polymerase
修飾酵素
100 U ¥17,000
¥13,600
2023/11/27~
2024/03/29

説明書・データシート・ベクター情報
2040A
2040B(A×5)

TKR

タカラバイオ(株)
T4 DNA Polymerase
修飾酵素
500 U ¥63,000
¥50,400
2023/11/27~
2024/03/29

説明書・データシート・ベクター情報
2040B(A×5)
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製品説明

本酵素は、鋳型DNA、プライマー存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5’→3’方向に合成する酵素である。本酵素は、Klenow Fragmentに比べて、約100~1,000倍強い一本鎖DNA特異的 3’→5’exonuclease活性が含まれているが、5’→3’exonuclease活性は持たない。

保存

-20℃

濃度

2~5 U/μl

形状

200 mMリン酸カリウム緩衝液(pH6.5)
1 mM DTT
50%グリセロール

添付Buffer組成(10×)

330 mMTris-acetate(pH7.9)
660 mMCH3COOK
100 mM(CH3COO)2Mg
5 mMDTT
0.1%BSA[別添付]

活性の定義

活性化ポリ(dA-dT)を鋳型/プライマーとして用い、37℃、pH8.8において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性を1 Uとする。

活性測定用反応液組成

67 mMTris-HCl(pH8.8)
6.7 mMMgCl2
16.6 mM(NH4)2SO4
1 mMDTT
6.7 μMEDTA
0.0167%ウシ血清アルブミン
7 μg/ml活性化ポリ(dA-dT)
各330 μMdATP、dTTP
8 μCi/ml[3H]dTTP

品質管理データ

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis(CoA)をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。

使用上の注意

  • 活性の発現にMg2+を要求し、最大活性のためにはSH還元剤を要求する1)
  • 反応系全体のイオン強度が100 mMを超えると阻害される2)
  • 10×添付Bufferに0.1%ウシ血清アルブミンを直接加えると多量の白沈が生じるので、反応液を調製する際は次の順番で試薬を加える。
      滅菌精製水→10×添付Buffer→0.1% BSA→基質DNA

用途

  • DNAフラグメント末端の平滑化4)
  • 3’→5’exonuclease活性を利用した、replacement synthesisによるDNAフラグメントの3’末端からの標識3, 6)

起源

Escherichia coli carrying the plasmid containing phage T4 DNA polymerase gene

一般的性質

  • 分子量
    114,000
  • サブユニット
    単純ポリペプチド
    15個のシステイン残基を持ち、活性に必須
  • 補因子
    Mg2+ (至適濃度:6 mM)、Mn2+(至適濃度:0.1 mM、6 mM Mg2+のときの1/4)、SH試薬(2-メルカプトエタノール、DTT等)
  • 活性化剤
    Polymerase活性は、T4 gene 32産物により特異的に顕著な活性の増大を示すが、exonuclease活性は飽和量のT4 gene 32産物により完全に阻害される。
  • 阻害剤
    NEM
  • 安定性
    vortex等の激しい撹拌により失活する。
  • 至適塩濃度
    100 mM(高すぎると阻害、200 mMで50 mMの5%)
  • polymerase活性とexonuclease活性の関係
    次の3つの条件が揃うとpolymerase活性を示す。
        1.鋳型
        2.鋳型より少なくとも1塩基は短い3'-OH末端のプライマー
        3.鋳型に相補的なdNTP
    このうち1つでも欠けるとexonucleaseとして働く。
注意事項
  • 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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