In-Fusionユーザーズボイス一挙ご紹介

簡単にクローニングがしたかった。1つのベクターに複数のフラグメントを導入したかった。
これまでなら、1つずつ導入していたので、導入の度にライゲーション・トランスフォーメーション・ピックアップ&チェックを繰り返していた。

ピックアップした5つのコロニーが全てあたり（目的物）でした。
ビックリしました。また、時間も節約できて助かりました。

ぜひ使ってみて下さい。驚きです！

最終的にタンパク質を発現させる目的でクローニングをしました。普段は制限酵素を用いてクローニングをしているのですが、制限酵素サイト分の余計なアミノ酸が付いた状態でタンパク質を発現させたくなかったので、そのような制限がない In Fusion クローニングを使用しました。

最初はうまくいくのか半信半疑でしたがうまくクローニングできました。
サブクローニングする手間が無いのでその分かなり時短になったと実感しました。

PCRさえ上手くいけばすぐにクローニングできます。
時短にもなりますのでぜひ試して見ることをおすすめします。

学会で出会った研究仲間からの勧められた。

操作が容易で、高確率でクローニングが成功することに感嘆した。

クローニングが上手くいかない方、研究費にゆとりのある方は、ぜひどうぞ。

クローニングの実験ってCase by caseでうまくいかないことが多いですが、本製品を使ってから安定性が高まりました!

騙されたと思って！

大腸菌で、制限酵素およびライゲーションによりプラスミドを構築する際、高次構造をとるような配列や、細胞にとって何らかの毒性がある（実際には不明）タンパク質の配列を導入しようとすると、全く大腸菌が生えなくなる、という現象に悩まされていました。中には、プレートには生えるが液体培養で生えないものもありました。
そのような際に、偶然In-Fusionのシステムに出会い、最初はダメモトで試してみようとしたのがきっかけです。

構築が困難だったプラスミドなので、本当にうまく行くのかあまり信頼せずに（すみません）実験を行ったところ、従来、どんなにコンピテンシーの高い大腸菌の系で行っても、1つのコロニーすら得られなかったものが、まず大腸菌が生えてきたことに驚きました。さらに、ピックアップした大腸菌の持っていたプラスミドが全て構築に成功したもので、二度驚きました。また、制限酵素サイトが合わないことであきらめていた発現ベクターへののせかえにも非常に有効で、研究の進展にとって大きく寄与してもらいました。ありがとうございました。
研究室では、制限酵素を用いたプラスミド構築系と併用しながら、困ったときの頼れる方法として信頼しています。

身の回りの方でも、「プラスミド作製の原理がわからなくなるから」という理由で、学生さんの使用に否定的な方はいらっしゃいます。ただ、従来の方法ではできないコンストラクションができるのも事実です。全ての系を切り替える、というわけでなくても、一部分導入するだけで、自由度の高い実験計画を立てることができるのではないかと思います。

ウイルス遺伝子のPCR増幅ができないものがあり、TaKaRaのTks GFlex polymeraseを使用することにより6kbくらいの長さのものまでスムーズに増幅が可能となった。そこでシステマティックにベクターへのクローニングを行うため、In-Fusionシステムの導入を行った。

非常に効率よくクローニングが可能となり大変満足しています。実は他社製品とも比較しましたが、Enhancerの効果も高いようで、成功確立が高くなりました。

末端に制限酵素認識部位を付加してクローニングする場合などでうまくいかない場合は、In-Fusionシステムをお勧めします。また、15bpの共通配列部分に制限酵素認識部位を含ませておき、使用する発現ベクターに同じ配列を付加してPCR増幅したものと結合させることにより、同じ遺伝子を複数のベクターですぐに発現させることが可能です。クローニングベクターの調製の手間も省くことができます。

営業の方が持ってきたチラシを見て、ちょうど数kbpの長い遺伝子を組込むベクター作製がうまくいっていなかったため、In-Fusionを利用して作製してみようと考えました。

目的の遺伝子をPCRで増幅し、cloning enhancer試薬を処理してIn-fusion反応を行うだけで、100%の確率で陽性コロニーを得ることが出来ました。面白い原理に基づいたクローニング方法だなと思っていたけど、実際使ってみて本当に高い確率でクローニングが出来、有用な手段だなと思いました。

制限酵素とligaseを用いたクローニングに比べて、プライマー作製分程度　割高かもしれませんが、実験が1回で完了するならコストパフォーマンスは高いと思います。特に大きな遺伝子の組込などに有用です。

mutagenesisの実験を多くしていた時に、新製品として登場した時のチラシのデータが信頼できそうに思え、ランニングコストも良さそうに見えたため。

初めての時はとにかく驚きました。3つの断片をベクターに組み込んだり、変異、欠失を導入したり、それまでsite-directed mutagenesisやオーバーラップ領域を使ったPCRでの遺伝子融合で苦労していた部分があっという間に解消しました。

まずは、試してみて下さい。ベクター構築のための苦労が長かった人程、その凄さが実感できると思います。制限酵素による切断端を使ってライゲーション反応で遺伝子をつなげるプロセスがないので、制限酵素サイトに悩まされることも少なくなりますし、なにより若手実験者の失敗が激減します。スケールダウンも可能です（タカラさんすみません）。

ほかの先生に勧められて

非常に簡単にうまくいった。

非常に便利です。

ほかの先生に勧められて

ぜひ、お勧めします！