反応液別相対活性
タカラバイオでは、Universal Buffer〔5種 Buffer中1種、■〕で酵素活性を測定し、その値を表示するシステムを採用している。その酵素活性を100％とした際の、各Universal Bufferでの相対活性を以下に記載する。（ ）は、Star活性等の影響を受けやすいバッファーを示している。これらの影響を避けるため、なるべく■か■のバッファーを使用することが望ましい。なお、Acc III、Bal I、Bcn I、Bgl I、Bpu1102 I、Cfr10 I、Eco52 I、Nru I、SnaB I、Ssp I、Taq I 、VpaK11B I（12品目）については、Basal Bufferを使用する。Basal Bufferの組成は各々の制限酵素で異なる（「Basal Bufferの組成」を参照）。また、Double digestionの参考に、各Universal Buffer別の使用推奨酵素〔反応液別相対活性■および■酵素〕を列挙した。なお、反応温度については酵素ごとに記載している。
| ■ | 添付・活性測定Buffer | ■ | 使用推奨Buffer | |
| 制限酵素 | 相対活性（％） | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| L | M | H | K | T＋BSA | Basal＊1 | |
| Aat II | <20 | <20 | <20 | <20 | 100 | 120 |
| Acc I | 20 | 100 | <20 | (<20) | 160 | 80 |
| Acc II | (260) | 100 | <20 | 20 | 200 | 160 |
| Acc III | (<20) | (<20) | 20 | (80) | (<20) | 100 |
| Afa I | 60 | 60 | 40 | 60 | 100 | 100 |
| Afl II | 20 | 40＊2 | <20 | <20 | 140 | 120 |
| Alu I | 100 | 100 | <20 | 40 | 200 | 120 |
| Aor13H I | <20 | 20 | <20 | 80＊2 | 80 | 100 |
| Aor51H I | 80 | 100 | <20 | 20 | 120 | 120 |
| Apa I | 100 | <20 | <20 | <20 | <20 | 120 |
| ApaL I | 100 | 20 | <20 | <20 | 120 | 120 |
| Bal I | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | 100 |
| BamH I | (40) | (60) | 80 | 100 | 60 | 160 |
| Ban II | (120) | (120) | 100 | 80 | (100) | 100 |
| BciT130 I | (<20) | (20) | 80 | 100 | (20) | 100 |
| Bcn I | <20 | 20 | 40 | 60 | 60 | 100 |
| Bgl I | <20 | <20 | 20 | 40 | <20 | 100 |
| Bgl II | <20 | 20 | 100 | (100) | (60) | 100 |
| Bln I | <20 | 20 | 40 | 100 | 40 | 120 |
| BmeT110 I | <20 | <20 | 20 | 100 | <20 | 140 |
| Bpu1102 I | <20 | <20 | <20 | 40 | 60 | 100 |
| BspT104 I | 100 | 60 | <20 | <20 | 100 | 120 |
| BspT107 I | <20 | 20 | 80 | 100 | 20 | 100 |
| Bsp1286 I | 100 | 20 | <20 | <20 | 60 | 100 |
| Bsp1407 I | 20 | 60 | 20 | 20 | 100 | 100 |
| BssH II | 100 | 100 | 60 | 20 | 140 | 100 |
| BstP I | (<20) | (60) | 100 | (100) | (100) | 100 |
| BstX I | <20 | 40 | 100 | <20 | <20 | 120 |
| Cfr10 I | (<20) | (<20) | (<20) | 40 | (20) | 100 |
| Cla I | 40 | 100 | 60 | 100 | 60 | 100 |
| Cpo I | <20 | <20 | 80 | 100 | <20 | 100 |
| Dde I | 40 | 60 | 60 | 100 | 80 | 80 |
| Dra I | 100 | 100 | 60 | 100 | 80 | 80 |
| Dpn I | 60 | 60 | 120 | 140 | 100 | 100 |
| Eae I | 60 | 100 | <20 | <20 | 120 | 160 |
| EcoO65 I | (20) | (60) | 60＊2 | 40 | 40 | 100 |
| EcoO109 I | 100 | 60 | <20 | <20 | 100 | 160 |
| EcoR I | (20) | (100) | 100 | (120) | (80) | 120 |
| EcoR V | (<20) | (40) | 100 | (120) | (40) | 100 |
| EcoT14 I | (<20) | (40) | 100 | 120 | (60) | 100 |
| EcoT22 I | <20 | 20 | 100 | (140) | (20) | 120 |
| Eco52 I | <20 | <20 | <20 | <20 | <20 | 100 |
| Eco81 I | <20 | 100 | <20 | <20 | 100 | 160 |
| Fba I | (<20) | (<20) | (80) | 100 | (20) | 100 |
| Fok I | (20) | (60)＊2 | <20 | <20 | (200) | 100 |
| 制限酵素 | 相対活性(％) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| L | M | H | K | T+BSA | Basal＊1 | |
| Hae II | 80 | 100 | <20 | 30 | (200) | 120 |
| Hae III | 60 | 100 | 100 | 60 | 100 | 100 |
| Hap II | 100 | 60 | <20 | <20 | 100 | 80 |
| Hha I | 80 | 100 | 150 | >300 | 150 | 80 |
| Hinc II | 20 | 100 | 20 | 40 | >240 | 100 |
| Hind III | (60) | 100 | <10 | 40 | (100) | 80 |
| Hinf I | 80 | 100 | 100 | 160 | 60 | 100 |
| Hpa I | <20 | (40) | 20 | 100 | (80) | 100 |
| Kpn I | (100) | 40 | <20 | <20 | 60 | (140) |
| Mbo I | 20 | 40 | 60 | 100 | 40 | 100 |
| Mbo II | 100 | 60 | <20 | <20 | 60 | 100 |
| Mfl I | 100 | 80 | <20 | <20 | 80 | 100 |
| Mlu I | 60 | 60 | 100 | (100) | 60 | 100 |
| Msp I | 40 | 40 | <20 | 40 | 100 | 60 |
| Mun I | (200) | 100＊2 | <20 | <20 | 160 | 100 |
| Nae I | 100 | <20 | <20 | <20 | 100 | 120 |
| Nco I | (40) | (60) | 20 | 20＊2 | (60) | 160 |
| Nde I | <20 | 40 | 100 | (100) | 20 | 100 |
| Nhe I | (120) | 100 | <20 | <20 | (160) | 100 |
| Not I | <20 | 20 | 100＊3 | 60 | (<20) | 60 |
| Nru I | 0 | <20 | 20 | 20 | <20 | 100 |
| PmaC I | 100 | 80 | <20 | <20 | 100 | 100 |
| Psp1406 I | 20 | 60 | <20 | <20 | 100 | 100 |
| Pst I | (<20) | (60) | 100 | 80 | (20) | 80 |
| Pvu I | (<20) | (20) | (40) | 80＊2 | (40) | 100 |
| Pvu II | (80) | 100 | 40 | <20 | (40) | 100 |
| RspRS II | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| Sac I | 100 | 60 | <20 | <20 | 80 | 80 |
| Sac II | 40 | 20 | <20 | <20 | 100 | 40 |
| Sal I | <20 | <20 | 100 | <20 | <20 | 200 |
| Sau3A I | (60) | 80 | 100 | <20 | (80) | 100 |
| Sca I | (<20) | (<20) | 100 | (60) | (<20) | 100 |
| Sfi I | (40) | 100 | <20 | <20 | 100 | 100 |
| Sma I | <20 | <20 | <20 | <20 | 100 | 100 |
| Smi I | <10 | <20 | 100 | 40 | <10 | 100 |
| SnaB I | (20) | (40) | <20 | <20 | (40) | 100 |
| Spe I | (80) | 100 | 80 | 100 | (80) | 100 |
| Sph I | (20) | (40) | 100 | 120 | (20) | 100 |
| Sse8387 I | (120) | 60＊2 | <20 | <20 | (60) | 100 |
| Ssp I | (<20) | (60) | 40 | (100) | (80) | 100 |
| Stu I | 60 | 100 | 60 | 80 | 140 | 100 |
| Taq I | 20 | 80 | 20 | 60 | 80 | 100 |
| Van91 I | <20 | (20) | 60 | 100 | (60) | 100 |
| VpaK11B I | <20 | <20 | 60 | (40) | <20 | 100 |
| Xba I | <10 | 50＊2 | <10 | <10 | 120 | 120 |
| Xho I | <20 | 40 | 100 | 100 | 30 | 100 |
| Xsp I | <20 | 60 | <20 | 100 | 160 | 100 |
*2 ＋0.01％ BSA →100％
Afl II、Aor13H I、EcoO65 I、Fok I、Mun I、Nco I、Pvu I、Sse8387 I、Xba I
*3 H Bufferのみでも100％の相対活性が得られますが、0.01％ BSA、0.01％ Triton X-100の添加で反応液中の酵素の安定性がより向上します。
Universal Buffer別酵素
| L | M | H | K | T+BSA |
|---|---|---|---|---|
| Afa I Alu I Aor51H I Apa I ApaL I BspT104 I Bsp1286 I BssH II Dra I Eae I EcoO109 I Hae II Hae III Hap II Hha I Hinf I Kpn I Mbo II Mfl I Mlu I Msp I Nae I PmaC I Sac I Stu I |
Acc I Acc II Afa I Afl II＊1 Alu I Aor51H I Bsp T104 I Bsp 1407 I BssH II Cla I Dra I Eae I EcoO109 I Eco81 I Fok I＊1 Hae II Hae III Hap II Hha I Hinc II Hind III Hinf I Kpn I Mbo II Mfl I Mlu I Msp I Mun I＊1 Nhe I PmaC I Psp 1406 I Pvu II Sac I Sau3A I Sfi I Spe I Sse8387 I＊1 Stu I Taq I Xba I＊1 Xho I Xsp I |
Ban II Bgl II BspT107 I BssH II BstP I BstX I Cla I Cpo I Dra I EcoO65 I＊1 EcoR I EcoR V EcoT14 I EcoT22 I Hae III Hha I Hinf I Mbo I Mlu I Nde I Not I＊2 Pst I Sal I Sau3A I Sca I Smi I Spe I Sph I Stu I Taq I Van91 I VpaK11B I Xho I |
Afa I Aor13H I＊1 BamH I Ban II Bci T130 I Bcn I Bln I BmeT110 I BspT107 I Cla I Cpo I Dde I Dra I EcoT14 I Fba I Hae II Hae III Hha I Hind III Hinf I Hpa I Mbo I Msp I Nco I＊1 Nde I Pst I Pvu I＊1 Spe I Sph I Stu I Taq I Van91 I Xho I Xsp I |
Aat II Acc I Acc II Afa I Afl II Alu I Aor13H I Aor51H I ApaL I Bcn I Bpu 1102 I Bsp T104 I Bsp 1286 I Bsp 1407 BssH II Cla I Dra I Eae I EcoO109 I Eco81 I Hae II Hae III Hap II Hha I Hinc II Hinf I Mbo II Mfl I Mlu I Msp I Mun I Nae I Nde I PmaC I Psp1406 I RspRS II Sac I Sac II Sfi I Sma I Stu I Taq I Xba I Xho I Xsp I |
Universal Buffer Set
タカラバイオでは、各制限酵素に活性測定に用いた10×Bufferを添付しています。また、これらをセットにしたUniversal Buffer Setもご用意しております。各制限酵素をお買い上げいただく際、ご要望があれば1セットを無料で商品に同封いたしますので、ご用命ください。なお、当セットのみの発送はお受けできませんのでご了承ください。
Universal Buffer Set内容物組成
| 1. | 10x L 1 ml | 100 mM | Tris-HCl (pH7.5) |
| 100 mM | MgCl2 | ||
| 10 mM | Dithiothreitol | ||
| 2. | 10x M 1 ml | 100 mM | Tris-HCl (pH7.5) |
| 100 mM | MgCl2 | ||
| 10 mM | Dithiothreitol | ||
| 500 mM | NaCl | ||
| 3. | 10x H 1 ml | 500 mM | Tris-HCl (pH7.5) |
| 100 mM | MgCl2 | ||
| 10 mM | Dithiothreitol | ||
| 1,000 mM | NaCl | ||
| 4. | 10x K 1 ml | 200 mM | Tris-HCl (pH8.5) |
| 100 mM | MgCl2 | ||
| 10 mM | Dithiothreitol | ||
| 1,000 mM | KCl | ||
| 5. | 10x T 1 ml (BSA-free) |
330 mM | Tris-acetate (pH7.9) |
| 100 mM | Mg-acetate | ||
| 5 mM | Dithiothreitol | ||
| 660 mM | K-acetate | ||
| 6. | 0.1% BSA 1 ml 滅菌水に溶解 | ||
| 7. | 0.1% Triton X-100 1 ml | ||
使用上の注意
反応液中に1/10量になるよう、バッファーを加える。
10×T溶液には、BSAは含まれていないので必ず最終濃度0.01％になるように、BSAを使用時に添加する。一部の制限酵素（*1と*2）では、反応系にBSAやTriton X-100を加えた場合に100％の活性を示すように設定されている。酵素に添付されているBSAやTriton X-100は10×濃度（0.1％）なので、バッファーと同様に反応液の1/10量を加えて反応を行うこと。
10×T溶液には、BSAは含まれていないので必ず最終濃度0.01％になるように、BSAを使用時に添加する。一部の制限酵素（*1と*2）では、反応系にBSAやTriton X-100を加えた場合に100％の活性を示すように設定されている。酵素に添付されているBSAやTriton X-100は10×濃度（0.1％）なので、バッファーと同様に反応液の1/10量を加えて反応を行うこと。
参考文献
1）Maniatis, T., et al.（1982）“Molecular Cloning”Cold Spring Harbor Laboratory, 98-106.
2）O'Farrell, P. H., et al.（1980） Mol. Gen. Genet. 179, 421-435.
2）O'Farrell, P. H., et al.（1980） Mol. Gen. Genet. 179, 421-435.
10×Loading Buffer
タカラバイオでは全制限酵素およびPremix制限酵素に10×Loading Buffer（1 ml）を添付しています。
■組成
| 0.9％ | SDS | |
| 50％ | Glycerol | |
| 0.05％ | Bromophenol Blue |
■使用上の注意
反応液量の1/10量以上の10×Loading Bufferを添加し、酵素反応を止め、アガロースゲルにアプライすること。また、室温での保存中にSDSが析出することがあるが、温浴で溶解して使用すること。■保存
開封後は室温
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