Tet-On/Off^® Advanced 発現誘導システム（IRESタイプ）

Tet-Dual Expression System（Tet-Advanced IRES Fluorescent Vector Set）は、クロンテックのTet-On AdvancedまたはTet-Off Advancedシステムに独自の技術を盛り込んでいる。IRES配列と蛍光タンパク質（mCherry、ZsGreen1）マーカーを利用することにより、発現調節、誘導が良好なクローンの選抜を容易に行え、スクリーニングにかかる時間を大幅に短縮できる。

哺乳類細胞で2種類のタンパク質の同時発現が可能
Tet-Dual Systemの特徴はIRES（internal ribosome entry site）配列を利用していることである。真核生物のmRNAは5’端に近い開始コドンから選択的に翻訳が開始される。IRES配列はリボソームを引きつけてmRNAの途中から2度目の翻訳を開始する。このため2つの異なる遺伝子がバイシストロニックに1つのmRNAから翻訳されることになる（図1、2）。バイシストロニックに転写される2つ目の遺伝子の発現レベルは蛍光タンパク質マーカーを指標に視覚的に容易にモニターできる。

一過性のプラスミド導入でも優れた調節性と高い誘導能
目的遺伝子の高い発現レベルと厳密な調節性が、一過性のプラスミド導入でも得られる（図3）。より高い発現レベル、またはより厳密な調節性を示すクローンを必要とされる場合には従来法どおり、調節ベクター、応答ベクターをトランスフェクション後、安定株のスクリーニングを行うことで可能になる。

図1. Tet-Dualシステムによる2つのタンパク質の同時発現
IRES配列は1つの転写産物からバイシストロニックに目的遺伝子とmCherryを発現


図2. Tet-Dualシステムベクター
pTet-Dual ON／OFF ベクターは、構成的にTet-On AdvancedまたはTet-Off Advanced調節因子と蛍光タンパク質ZsGreen1を発現する（パネルA）。
Tet調節性の応答ベクターpTRE-Dual2は、mCherryとMCSにクローニングした2つ目の遺伝子を同時に発現（パネルB）。pTRE-Dual1（終売）はMCS上の任意の2つの遺伝子を同時に発現する。


図3. 誘導された発現の確認
pTet-Dual OFFベクター、pTRE-Dual2-luciferaseコントロールベクター、ピューロマイシン耐性ベクター（リニアライズド）をHEK 293細胞にトランスフェクションしてから14日後、ピューロマイシン選択培地上のコロニーは2種類の蛍光を示した（パネルA）。クローンはTet-Off Advanced調節タンパク質とZsGreen1を共発現している。Doxの非存在下で、クローンはmCherryとルシフェラーゼ遺伝子の発現が誘導され、HEK 293細胞は赤色の蛍光を示している。Dox濃度依存的に減少するルシフェラーゼの発現（RLU）をパネルBに示した。

語句補足
・Tet調節ベクター：
　トランスアクチベーター（Tet-On/Off Advancedタンパク質）を発現するベクター（pTet-Dual ON/OFF Vector）
・TRE^*応答ベクター：
　Tet調節タンパク質により誘導される発現ベクター（pTRE-Dual1（終売）、pTRE-Dual2 Vector）
* Tet Response Element

Tet-On Advanced IRES Fluorescent Vector Set
（製品コード 631112）
・pTet-DualON Vector
・pTRE-Dual2 Vector
・pTRE-Dual2-Luc Control Vector
・Linear Hygromycin Marker
・Linear Puromycin Marker

Tet-Off Advanced IRES Fluorescent Vector Set
（製品コード 631113）
・pTet-DualOFF Vector
・pTRE-Dual2 Vector
・pTRE-Dual2-Luc Control Vector
・Linear Hygromycin Marker
・Linear Puromycin Marker

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