tdTomato 蛍光タンパク質ベクター

tdTomatoは非常に明るい赤色蛍光タンパク質であり、EGFPの2.5倍の蛍光強度を示す。tdTomatoは、dTomato（dimeric Tomato）遺伝子2つをタンデムにつなぎ合わせ、タンデム2量体を形成するよう設計されている。これにより非常に明るい蛍光シグナルが得られ、しかも凝集性は極めて低く抑えられている（1）。この蛍光強度と581 nmの蛍光極大波長を持つため、動物個体でのイメージング解析に理想的であり、マウスへ移植した肺がん細胞の転移を調べた例では表皮から1 cmの深度まで蛍光が検出されている(2)。
また、tdTomatoは分子内二量体構造をとるため、単量体のような物理的特性を示すことが分かっており、N-、C-末端融合タンパク質の作製にも適している(3)。プロモーターアッセイでのレポーターとしての使用報告もある(4)。
tdTomatoの検出にはLiving Colors DsRed Monoclonal Antibody（製品コード 632392）、Living Colors DsRed Polyclonal Antibody（製品コード 632496）が利用可能である。

＊a : Unless otherwise specified (see footnotes f and g), the Relative Quantum Yield of each fluorescent protein (QFP) was determined using the following equation : QFP = (Qfluo^* FFP^* ODfluo) / (Ffluo^* ODFP), where F is the fluorescence and OD is the optical density of either the fluorescent protein (FP) or the reference fluorophore (fluo).
＊b : Unless otherwise specified (see footnotes f and g), the Molar Extinction Coefficient (ε) for each protein was determined as follows: A = εcl (Beer-Lambert law) or ε = A/c, where A = absorbance, c = concentration (determined by the Bradford Protein Assay), l = path length (1 cm). Each molar extinction coefficient was determined at the absorption maxima of its respective protein.
＊c : Brightness = (Quantum Yield) (Extinction Coefficient)
＊d : C.T.= Chroma Technologies



図1. SCIDマウスモデルでのtdTomatoおよびGFPの蛍光検出
疑似色オーバーレイ画像（False-color overlay images；目的の領域を丸で囲んでいる）より、イメージングシステムはマウスモデルの中のtdTomatoの蛍光を検出できたが、GFPの蛍光を検出できなかった。
パネルA．100×10⁶個のMDA-MB-231-tdTomato発現細胞を含むチューブを移植し、DsRedフィルターセットを用いてイメージングして得た画像。露光時間：1秒。
パネルB．100×10⁶個のMDA-MB-231-GFP発現細胞を含むチューブを移植し、GFPフィルターセットを用いてイメージングして得た画像。露光時間：1秒。



図2. tdTomato蛍光タンパク質融合ベクターのベクターマップ(哺乳類細胞用)
左：N末端融合蛍光タンパク質ベクター、右：C末端融合蛍光タンパク質ベクター



図3. tdTomato蛍光タンパク質のベクターマップ(細菌用)
大腸菌発現ベクターは、蛍光タンパク質遺伝子の供給源としても利用できる。なお3' MCSの5'側に停止コドンがあるため、3' MCSは融合タンパク質の作製には使用できない。

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