黄色ブドウ球菌の検出
【重要なお知らせ】
弊社リアルタイムPCR装置「Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ」において弊社遺伝子検査キットを使用する場合の解析条件を変更いたしました。
変更の詳細はこちら
取扱説明書およびその他製品に付随する文書は、順次更新予定です。
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製品説明
黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）は、ヒトや動物の皮膚、消化管に存在する常在細菌の一種で、食品中で増殖するとエンテロトキシンと呼称される毒素を産生し、食中毒の原因となる。
本キットは、ハウスキーピング遺伝子の1つであり、菌種間でも多様性を持つDnaJ遺伝子をターゲットとして、黄色ブドウ球菌をリアルタイムPCR装置を用いて特異的に検出するキットである。
本キットによる増幅にはHot Start PCR用酵素、TaKaRa Ex Taq HSを使用しており、反応液調製時などサイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができ、高感度の検出が可能になる。
増幅産物の検出にはサイクリングプローブ法を採用している。サイクリングプローブ法は、RNAとDNAからなるキメラプローブとRNase Hの組み合わせによる高感度な検出方法で、増幅中や増幅後の遺伝子断片の特定配列を効率良く検出することが出来る。プローブは片方の端が蛍光物質で、もう片方の端が蛍光物質の発する蛍光を消光する物質（クエンチャー）で標識されている。このプローブは、インタクトな状態ではクエンチングにより蛍光を発することはないが、配列が相補的な増幅産物とハイブリッドを形成した後にRNase HによってRNA部分で切断されることにより、強い蛍光を発するようになる。この蛍光強度を測定することで、増幅産物量をモニターすることが出来る。
本キットには、黄色ブドウ球菌のDnaJ遺伝子に由来する増幅産物を検出するためのFAM標識プローブ、ならびにインターナルコントロールDNAとインターナルコントロール由来増幅産物を検出するためのROX標識プローブが含まれている。二波長を同時にモニタリングすることで、一本のチューブでDnaJ遺伝子の検出と、インターナルコントロールDNAの検出による偽陰性のモニターが可能である。リアルタイムPCRによる検出なので電気泳動が不要であり、迅速に結果が得られる。
本製品は、岐阜大学大学院医学系研究科病原体制御学分野 教授 江崎孝行先生のご協力のもとに開発いたしました。
本キットは、ハウスキーピング遺伝子の1つであり、菌種間でも多様性を持つDnaJ遺伝子をターゲットとして、黄色ブドウ球菌をリアルタイムPCR装置を用いて特異的に検出するキットである。
本キットによる増幅にはHot Start PCR用酵素、TaKaRa Ex Taq HSを使用しており、反応液調製時などサイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができ、高感度の検出が可能になる。
増幅産物の検出にはサイクリングプローブ法を採用している。サイクリングプローブ法は、RNAとDNAからなるキメラプローブとRNase Hの組み合わせによる高感度な検出方法で、増幅中や増幅後の遺伝子断片の特定配列を効率良く検出することが出来る。プローブは片方の端が蛍光物質で、もう片方の端が蛍光物質の発する蛍光を消光する物質（クエンチャー）で標識されている。このプローブは、インタクトな状態ではクエンチングにより蛍光を発することはないが、配列が相補的な増幅産物とハイブリッドを形成した後にRNase HによってRNA部分で切断されることにより、強い蛍光を発するようになる。この蛍光強度を測定することで、増幅産物量をモニターすることが出来る。
本キットには、黄色ブドウ球菌のDnaJ遺伝子に由来する増幅産物を検出するためのFAM標識プローブ、ならびにインターナルコントロールDNAとインターナルコントロール由来増幅産物を検出するためのROX標識プローブが含まれている。二波長を同時にモニタリングすることで、一本のチューブでDnaJ遺伝子の検出と、インターナルコントロールDNAの検出による偽陰性のモニターが可能である。リアルタイムPCRによる検出なので電気泳動が不要であり、迅速に結果が得られる。
本製品は、岐阜大学大学院医学系研究科病原体制御学分野 教授 江崎孝行先生のご協力のもとに開発いたしました。
内容
（25 μl反応、50回）
*1 蛍光標識プローブを含んでいるため、遮光に留意すること。
| ● | 1. | 2×CycleavePCR Reaction Mix | 625 μl | ||
| ● | 2. | S. aureus Primer/Probe Mix（FAM, ROX）*1 | 5×conc. | 250 μl | |
| ○ | 3. | dH2O | 1 ml | ||
| ● | 4. | S. aureus Positive Control | 50 μl | （10回分） |
*1 蛍光標識プローブを含んでいるため、遮光に留意すること。
保存
－20℃
キット以外に必要なもの（主なもの）
- 【機器】
- リアルタイムPCR装置および専用チューブ
Thermal Cycler Dice Real Time System シリーズ（製品コード TP900/TP960：終売 など）*2
食品環境検査用ソフトウェア（日本語表示）Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
または、Thermal Cycler Dice Real Time System Software
StepOnePlus Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）など
- ヒートブロック（95℃まで温度を上げられるもの）
-
*2 チューブ1本ごとにフラットキャップが付いているキャップ付き0.2 ml 8連チューブをThermal Cycler Dice Real Time System専用として販売している。チューブ間のコンタミネーションリスクを軽減できる。
0.2 ml 8-strip tube, individual Flat Caps（製品コード NJ600） - 【その他】
- 1,000 μl、200 μl、20 μl、10 μl 各マイクロピペット
- マイクロピペット用チップ（疎水性フィルター付）
- 卓上遠心器
- 微量高速遠心機（4℃設定可能なもの）
補足資料
Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ「食品環境検査用ソフトウェア」を使用の場合に便利な“Quick Manual”を用意している。
キットに添付の取扱説明書とあわせて使用する。
CycleavePCRキットによる定性解析（PDF、989 K）
キットに添付の取扱説明書とあわせて使用する。
CycleavePCRキットによる定性解析（PDF、989 K）
Application
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- 注意事項
- 本製品は食品分析および環境分析用試薬です。ヒト、動物への医療、臨床診断には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。検査結果判定により発生する問題に関してタカラバイオ株式会社は一切の責任を負いません。
- タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
- タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。
また、他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。 - ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。
