新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）変異検出キット（Direct）

本製品は、新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）のスパイクタンパク質におけるN501Y、E484K、L452Rの変異を検出するための迅速・簡便なリアルタイムPCR試薬で、各変異をそれぞれ特異的に検出するためのプライマー・プローブと、コアキット（PCR酵素ミックスと前処理試薬のセット）を組み合わせて使用する。
製品化にあたり、群馬パース大学大学院 木村博一教授に監修していただいた。

※N501YおよびE484K変異は、新型コロナウイルスのスパイクタンパク質にみられるアミノ酸変異である。これらの変異を持つ変異株として以下が知られている。

• N501Y変異：英国株VOC 202012/01、南アフリカ株501Y.V2およびブラジル株501Y.V3 ほか。
• E484K変異：南アフリカ株501Y.V2、ブラジル株501Y.V3 ほか。
• L452R変異：インド株B.1.617、カリフォルニア株B.1.427およびB.1.429 ほか。

【特長】

• プライマー・プローブとコアキットを組み合わせて自由に使用可能
  本シリーズのプライマー・プローブはすべて、SARS-CoV-2 Direct Detection RT-qPCR Core Kit（製品コード RC330A）^＊と組み合わせて使用可能です。
  ＊ SARS-CoV-2 Direct Detection RT-qPCR Kit（製品コード RC300A/RC30JW）と同じ反応系です。
  　 反応条件は、プライマー・プローブの取扱説明書をご確認ください（一部温度条件が異なります）。
• RNA精製は不要、ダイレクトに検出！
  サンプルと前処理試薬の混合液を熱処理するだけの簡便な前処理でRT-PCRが可能
• 前処理から検出まで1時間以内、迅速に判定可能

【検出フロー】

SARS-CoV-2 Direct Detection RT-qPCR Core Kit（製品コード RC330A）（100回分）

Primer/Probe N501Y (SARS-CoV-2)　（製品コード RC344A）（300 μl）
Primer/Probe E484K (SARS-CoV-2)（製品コード RC345A）（300 μl）
Primer/Probe L452R (SARS-CoV-2) Ver.2（製品コード RC346A）
Positive Control RNA Set (N501Y)（製品コード RC371A）
Positive Control RNA Set (E484K)（製品コード RC372A）
Positive Control RNA Set (L452R)（製品コード RC373A）
＊1 酵素、基質等を含む。
＊2 蛍光物質を含んでいるため、遮光に留意すること。
＊3 蛍光標識プローブを含んでいるため、遮光に留意すること。
＊4 陰性コントロールとして使用。
＊5 陽性コントロールとして使用。
＊6 陽性コントロールの希釈に用いるバッファー。

※ コントロールRNAについて：
　本製品では、以下の市販品を使用可能であることを確認しています。
・Control 2 (MN908947.3)（Twist Bioscience社、#102024）：501N Wild Template、484E Wild Templateとして使用
・Control 16 (B.1.351, EPI_ISL_678597)（Twist Bioscience社、#104043）：N501Y Mutant Template、E484K Mutant Templateとして使用

RC330A、RC344A、RC345A、RC346A：－20℃
RC371A、RC372A、RC373A：－80℃

＜N501Y変異検出およびE484K変異検出＞
Twist Bioscience社のControl 2 (MN908947.3) およびControl 16 (B.1.351, EPI_ISL_678597)を適宜希釈し、1反応当り 0（RNase Free H₂O）、50、500、5,000コピーを鋳型として使用した場合の反応例を以下に示す。
（qPCR装置はQuantStudio 5 Real-Time PCR Systemを使用）


＜L452R変異検出＞
Positive Control RNA Set (L452R)の Positive Control RNA (wild)およびPositive Control RNA (L452R)を適宜希釈し、1反応当り 0（Negative Control）、50、500、5,000コピーを鋳型 として使用した場合の反応例を以下に示す。
（qPCR 装置は QuantStudio 5 Real-Time PCR Systemを使用

本製品を使用する際の注意事項です。使用前に必ずお読みください。

1. 使用目的：
   本キットは、研究用試薬です。
2. 測定結果：
   本製品はウイルス遺伝子を検出する試薬であるため、感染性のない不活化されたウイルスを検出する可能性があります。
   また、Primer/Probeの配列内に遺伝子の変異や欠損／挿入が生じた際には、検出できない場合があります。
   （反応結果により発生する問題に関して、タカラバイオ株式会社は一切の責任を負いません。）
3. 廃棄：
   試料は感染性を有するものとして、各施設の安全規定に従って廃棄してください。作業区域は常に清潔に保ち、検体または検査に用いた器具等は高圧蒸気滅菌器を用いて121℃で20分間以上加熱滅菌処理、または次亜塩素酸ナトリウム液で処理を行った上、各施設の感染性廃棄処理マニュアルに従って処理してください。試薬を廃棄する際は多量の水で流してください。
   プラスチックなどの試薬容器ならびに器具は、廃棄物の処理および清掃に関する法律に従って処理してください。

【Quick Manual】
Thermal Cycler Dice Real Time SystemシリーズおよびCronoSTAR 96 Real-Time PCR Systemシリーズを使用の場合に便利な“Quick Manual”をご用意しています。 キットに添付の取扱説明書とあわせてご使用ください。

• Thermal Cycler Dice Real Time System III (Cy5) with PC（製品コード TP990）
• Thermal Cycler Dice Real Time System Lite（製品コード TP700）：終売
• CronoSTAR 96 Real-Time PCR System（製品コード 640231/640232）
• CronoSTAR Portable Real-Time PCR System（製品コード 640247/640249）

• Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ操作マニュアル －SARS-CoV-2 Direct Detection RT-qPCR Kit（RC330A, RC344A, RC371A）専用－
• Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ操作マニュアル －SARS-CoV-2 Direct Detection RT-qPCR Kit（RC330A, RC345A, RC372A）専用－
• CronoSTAR 96 Real-Time PCR Systemシリーズ操作マニュアル －SARS-CoV-2 Direct Detection RT-qPCR Kit（RC330A, RC344A, RC371A）専用－
• CronoSTAR 96 Real-Time PCR Systemシリーズ操作マニュアル －SARS-CoV-2 Direct Detection RT-qPCR Kit（RC330A, RC345A, RC372A）専用－
• CronoSTAR Portable Real-Time PCR Systemシリーズ操作マニュアル －SARS-CoV-2 Direct Detection RT-qPCR Kit（RC330A, RC344A, RC371A）専用－
• CronoSTAR Portable Real-Time PCR Systemシリーズ操作マニュアル －SARS-CoV-2 Direct Detection RT-qPCR Kit（RC330A, RC345A, RC372A）専用－