TaKaRa 炭疽菌 PCR Detection Kit

炭疽菌は、芽胞を形成する好気性グラム陽性桿菌であり、その病原性は、2種類の毒性プラスミド（pX01、pX02）によるものである。pX01プラスミドは3種類の毒素成分(PA: protective antigen, LF: lethal factor, EF: edema factor)をコードしている。一方、pX02プラスミドは莢膜合成に関係する遺伝子(capA, capB, capC)をコードしている。これら2種類の毒性プラスミドの両方を保持する場合に病原性を示す。
TaKaRa 炭疽菌 PCR Detection Kitは、pX01プラスミドに含まれるPA遺伝子およびpX02プラスミドに含まれるcapA遺伝子をPCR法により一本の反応チューブで同時に増幅し、アガロースゲル電気泳動により検出するためのキットである。増幅にはHot Start用酵素（TaKaRa Ex Taq HS）を使用しているので、反応液調製時などサイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができ、高感度の検出が可能となっている。また本キットにはインターナルコントロールが含まれているため、偽陰性をモニターすることができる。

なお、本キットの製品化にあたり、帯広畜産大学畜産学部獣医学科 牧野壮一先生にご協力をいただきました。

（48回分）

TaKaRa Ex Taq HS（5 units/μl）	12.5 μl
5×Reaction Mixture*1	500 μl
PA Primers（PA7, PA6）（各10μM）	200 μl
CAP Primers（M011, M012）（各10μM）	200 μl
100 bp DNA Ladder（650 ng/5μl）	50 μl
6×Loading buffer*2	60 μl

*1 dNTP Mixture、Internal Control を含む。
*2 36％ グリセロール、30 mM EDTA、0.05％ Bromophenol Blue、0.035％ キシレンシアノール

－20℃

本キットを用いた検出過程では、さらに次のような試薬、機器を必要とする。

【試薬】

1. 滅菌精製水

2. PrimeGel Agarose PCR-Sieve（製品コード 5810A）

3. 電気泳動用buffer ［Tris-Borate-EDTA Buffer (TBE) Powder, pH8.3（製品コード T9121）など］

4. DNA染色剤　[SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain（製品コード 5760A/5761A）、またはエチジウムブロマイド]

【機器】

1. サーマルサイクラー
　　[TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Touch（製品コード TP350：終売）]
　　[TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Gradient (製品コード TP600：終売)]

2. 電気泳動装置
　　Mupid-2plus（製品コード M-2P）
　　Mupid-exU（製品コード EXU-1）
　　Mupid-One（製品コード O1-01）など

3. 電気泳動ゲル撮影用装置（SYBR Green Iを使用する場合は専用のフィルターが必要です。）

4. UVトランスイルミネーター（300 nm前後のもの）

5. 電気泳動ゲル撮影用ポラロイドカメラ （SYBR Green Iを使用される場合は専用のフィルターが必要です。）

6. ヒートブロック(95℃まで温度を上げられるもの)

7. 1.5 mlチューブ対応型冷却遠心機

【その他】

1. 0.2 ml PCR tube[0.2 ml Hi-Tube Dome Cap (製品コード NJ200)]など

2. マイクロピペット

3. マイクロピペット用チップ（疎水性フィルター付き）

4. ポラロイドフィルム

5. アガロースゲル染色用トレイ(SYBR Green Iを使用される場合は、ポリプロピレン製容器を使用してください。)