糞便よりRNAを精製
- ヒト、動物の糞便サンプルからsmall RNAを含むtotal RNAを迅速に精製
- セラミックビーズを含むMN Bead Tubes TypeAによる物理的な破砕とフェノールを含むNucleoZOLによる化学的な溶解を組み合わせてRNAを強力に抽出
- NucleoSpin inhibitor removal columnにより PCR阻害物質を除去
製品説明
NucleoSpin RNA Stoolは、新鮮および凍結糞便サンプルからsmall RNAを含むRNAを効率よく抽出するキットである。
本キットはMN Bead Tubes Type A（セラミックビーズを含む）による物理的な破砕とフェノールを含むNucleoZOLと専用の溶解バッファーLysis Buffer RST1による化学的な溶解を組み合わせて、微生物を含む糞便サンプルを効率的に溶解する。溶解液からは、付属のNucleoSpin Inhibitor Removal Columnによって、糞便サンプル中に含まれる逆転写反応やPCRの阻害物質を効果的に除去することができる。このろ液からRNA結合性のスピンカラムを用いてsmall RNAを含むtotal RNAを迅速に精製することができ、また、添付のrDNaseでオンカラム処理を行うことにより、DNAの除去を行うことも可能である。
本キットはMN Bead Tubes Type A（セラミックビーズを含む）による物理的な破砕とフェノールを含むNucleoZOLと専用の溶解バッファーLysis Buffer RST1による化学的な溶解を組み合わせて、微生物を含む糞便サンプルを効率的に溶解する。溶解液からは、付属のNucleoSpin Inhibitor Removal Columnによって、糞便サンプル中に含まれる逆転写反応やPCRの阻害物質を効果的に除去することができる。このろ液からRNA結合性のスピンカラムを用いてsmall RNAを含むtotal RNAを迅速に精製することができ、また、添付のrDNaseでオンカラム処理を行うことにより、DNAの除去を行うことも可能である。
| 原理 | シリカメンブレン法 |
| 形状 | ミニスピンカラム |
| サンプル量 | 約200 mg（180～220 mg）糞便（新鮮便、凍結便） |
| 精製サイズ | ＞18 bases |
| 回収量 | 10～30 μg |
| A260/280 | 1.9～2.1 |
| A260/230 | 1.8～2.5 |
| 標準的RIN値 | ＞7.5 |
| 溶出量 | 100 μｌ |
| 精製時間 | 70分／10サンプル |
| 結合容量 | 200 μg |
操作手順
用途
- 糞便サンプルからのRNA精製
- 精製RNAはリアルタイムRT-PCR、ノーザンブロッティング、primer extension、マイクロアレイ解析、RNase protectionアッセイ、次世代シーケンスなどに使用可能
ヒト糞便からのRNA抽出
NucleoSpin RNA Stoolおよび他社キット（Q, Z）を用いて2種類のヒト糞便サンプルから糞便採取後4時間以内にDNase処理を含むプロトコールでRNA抽出を行った。
NucleoSpin RNA Stoolは 200 mgのヒト糞便サンプルから、他社のキットは250 mgのヒト糞便サンプルからそれぞれのプロトコール通りの方法で行った。
Q社のプロトコールはオプションのフェノールベースの溶解ステップも行った。
各試料からそれぞれ3回に抽出を行い、RNAの収量（A）、逆転写qPCRの結果（B）を比較した。
RNA収量の比較では、NucleoSpin RNA Stoolを使用した場合に最も収量が良く、20～60％高い収量が得られることが分かった。（マッハライ・ナーゲル社比較データ）
逆転写qPCRにおいてもNucleoSpin RNA Stoolで回収したRNAは、もっともCp値が低くなり、他社キットに比べて良好な結果が得られた。なおこの実験の際にはすべてのキットで100μlでカラムより溶出を行った。（マッハライ・ナーゲル社比較データ）
内容
・NucleoZOL
・Lysis Buffer RST1
・Binding Buffer RST2
・Wash Buffer RST3
・Wash Buffer RST4
・Wash Buffer RST5（Concentrate）
・RNase free H2O
・Reaction Buffer for rDNase
・rDNase, RNase free（凍結乾燥品）
・MN Bead Tubes Type A
・NucleoSpin Inhibitor Removal Column（赤リング）
・NucleoSpin RNA Stool column（青リング）
・Collection Tubes（2 ml）
・Collection Tubes（2 ml、蓋付）
・Lysis Buffer RST1
・Binding Buffer RST2
・Wash Buffer RST3
・Wash Buffer RST4
・Wash Buffer RST5（Concentrate）
・RNase free H2O
・Reaction Buffer for rDNase
・rDNase, RNase free（凍結乾燥品）
・MN Bead Tubes Type A
・NucleoSpin Inhibitor Removal Column（赤リング）
・NucleoSpin RNA Stool column（青リング）
・Collection Tubes（2 ml）
・Collection Tubes（2 ml、蓋付）
保存
rDNase、RNase-free (凍結乾燥品)：4℃
その他：室温
その他：室温
本製品以外に必要な試薬、機器（主なもの）
- 試薬
- ・96～100％エタノール
- 器具
-
・1.5 mlマイクロチューブ
・2.0 mlマイクロチューブ
・Collection Tubes (2 ml)（オプション）
・ピペットチップ（滅菌済）
・ピペット
・微量高速遠心器
・推奨細胞破砕装置：
Vortex-Genie 2（サイエンティフィックインダストリーズ社）＋MN Bead Tube Holder（製品コード 740469）
撹拌式細胞破砕装置（Retsch社 MM200など）
MN Bead Tube Holder（製品コード 740469）
この製品の使用方法はこちらをご覧ください。
NucleoSpinはマッハライ・ナーゲル社の登録商標です。
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- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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