NucleoSpin^® Blood L Vacuum

NucleoSpin Blood L Vacuumは、2 ml全血から吸引法により高純度ゲノムDNAを精製するキットである。NucleoVac 96 Vacuum Manifold（製品コード 740681）とStarter Set Midi（製品コード 740744）を使用して、時間と手間のかかる遠心操作を必要とせず、24サンプルの同時処理が行える。
精製操作は、カオトロピック塩を含む溶液中で血液サンプルをProteinase Kで溶解し、結合バッファーを加えた後、カラムへアプライする。カラムの洗浄後、DNAを溶出する。通常、全工程はおおよそ75分間で終了する。
このキットは、新鮮EDTA血、クエン酸血や他の抗凝固剤処理血に使用できるだけでなく、凍結血液サンプルにも使用できる。
Starter Set Midiは、手動と自動の吸引法に対応したSBS規格に合致したカラムホルダーのColumn Holder Midi、Wash Plate MidiとElution Tube Holder Midiを含んでおり、NucleoVac 96 Vacuum Manifoldを用いて NucleoSpin Blood L Vacuumを使用する際に必要である。また、この製品は24に満たないサンプル数に対応するためのdummy stripsも含んでいる。

原理	シリカメンブレン法
形状	Midiスピンカラム
サンプル量	全血：1～2 ml
精製サイズ	200 bp～約50 kb
回収量	50～80 μg（2 ml 全血）
A260/280	1.6～1.9
回収濃度	100～130 ng/μl
溶出液量	300 μl×2
精製時間	75分
結合容量	250 μg

・Lysis Buffer BLV
・Binding Buffer BLV2
・Wash Buffer BLV3
・Wash Buffer BLV4 (Concentrate)
・Elution Buffer BLV5^＊
・Liquid Proteinase K
・NucleoSpin Blood L Columns
・Collection Tubes (1.5 ml)
・Lysis Block
・Sample Waste Block

* 5 mM Tris/HCl, pH8.5

NucleoSpin Blood L Columns：4℃
その他：室温

試薬
・96～100%エタノール
・PBS

器具
・NucleoVac 96 Vacuum Manifold（製品コード 740681）
・Starter Set Midi（製品コード 740744）
・振盪恒温槽
・ピペット
・ピペットチップ（滅菌済）

図1．新鮮血、凍結血からのDNA精製
DNAは、各サンプル中のリンパ球数に依存し、健常人血液1 ml当り20～30 μgが回収できる。
NucleoVac 96 Vacuum Manifold と Starter Set Midiを使用し、キット標準プロトコールに従って2 mlの新鮮な血液サンプル及び凍結血液サンプルからNucleoSpin Blood L Vacuumを用いてDNAを精製した。溶出は600 μlで行った。
A)に回収されたDNA量、B)に精製されたDNA純度（A_260/A280）を示す。


図2．2 ml血液から得られた高分子DNAの電気泳動
図1と同じく、24の新鮮または凍結2 ml混合血液サンプルからNucleoSpin Blood L Vacuumを用いてDNAを精製した。精製されたDNAをアガロース電気泳動で解析した。 （A）新鮮血、（B）凍結血からのDNA


図3．NucleoVac 96 Vacuum ManifoldとStarter Set Midiの使用時のコンタミ試験
12の血液サンプルをStarter Set Midiの1つおきに配置して、NucleoSpin Blood L Vacuumを用いてDNAを精製した。精製したDNAを鋳型にqPCRで各カラムのDNA量を検証した。
（A）に配置したサンプルのパターン、（B）にqPCRのCt値を示す。
空カラムからはDNAが検出されず、コンタミが起こらないことが示された。

NucleoSpinはマッハライ・ナーゲル社の登録商標です。