DNA Ligation Kit

DNAフラグメントのライゲーションは、遺伝子工学実験で頻繁に行う操作である。DNA間の結合にはT4 DNA Ligaseが用いられるが、DNAの末端構造によって反応速度は著しく異なる。そのため、DNAの末端形状によって加える酵素量を加減したり、ポリアミンや2価金属塩を加えることによりライゲーション反応を調節して行う必要がある。
タカラバイオでは、このような煩雑さをなくし、さらにDNAの末端形状による影響を受けないシステム、DNA Ligation Kitを開発した。
DNA Ligation Kitでは、ポリエチレングリコールを用いたタカラバイオ独自のBuffer系を採用することにより、従来数時間かかっていたライゲーション反応を、ほとんどの場合、非常に短時間で完了できる。
標準の反応条件は16℃、30分間だが、簡単なプラスミドベクターへのライゲーションなどは25℃、3分間の反応でも十分なライゲーション効率が得られ、反応を大幅に簡略化できる。
Ver.1は、環状DNAを生成するライゲーションはもちろん、λファージへの外来DNAの挿入などの直鎖状DNAを生成するライゲーションにも適したキットである。A液の使用量を調製することで、DNA溶液に由来する不純物などの持ち込みの影響を軽減し、確実にライゲーションを行うことができる。
Ver.2.1 は、DNA溶液にI液を加えるだけの最小限の反応液量で、効率良く環状DNAを生成するライゲーションを行うことができる。また、プラスミドベクターへの外来DNAの挿入を行った後にIII液を加えることにより、大腸菌コンピテントセルへの形質転換効率を向上させることができる。

【！】新発売のDNA Ligation Kit ＜Mighty Mix＞ (製品コード 6023) は、Ver.2.1の性能を更に改良した1液タイプの簡便な試薬です。TAクローニングにも威力を発揮しますので、是非お試しください。

表1 DNA Ligation Kit Ver.1/Ver.2.1 反応液量（容量比）の比較

	Ver. 1（容量比）	Ver. 2.1（容量比）
環状DNAを生成するライゲーション ●プラスミドベクターへの外来DNAの挿入 ●プラスミドベクターへのLinker DNAの挿入 ●Self-circularization	DNA溶液 （1） A液 （4～8） B液 （1）	DNA溶液 （1） I 液 （1）
直鎖状DNAを生成するライゲーション ●cDNAへのAdaptor、Linker Ligation ●λ ファージベクターへの外来DNAの挿入*	DNA溶液 （1） （300 mM NaCl） B液 （1）	DNA溶液 （1） II 液 （1） I 液 （2）

^*Ver. 1の使用をお勧めします。

DNA Ligation Kit Ver.1

A液	Reaction Buffer	1,000 μl×3
B液	Enzyme Solution	187.5 μl×2*

* 1反応あたりB液7.5 μlの使用で50回分に相当する。

DNA Ligation Kit Ver.2.1

I液	Enzyme Solution	250 μl×3*
II液	Concatenation Buffer	750 μl
III液	Transformation Enhancer	200 μl

* 1反応あたりI液7.5 μlの使用で100回分に相当する。

－20℃
Ver.2.1のIII液のみ、融解後は室温保存

 

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