Advantage-GC 2 Polymerase Mixは、従来のPCR技術では困難であった、哺乳類cDNAの5’末端のようにGCリッチな領域の増幅に有効なポリメラーゼミックスである。本製品にはAdvantage 2 Polymerase Mixの他に、GC-Melt ReagentとDMSOを含む反応バッファーが含まれている。いずれも効果が確かな添加物なので、最低限の至適化を行えば、GC含量90%までの配列を増幅することができる(図1)(1)。
DMSOとGC-Meltをともに用いることで、標準的なPCR増幅では増幅困難なGCリッチ配列でも増幅が可能となる。GCリッチなcDNAやゲノムDNAを増幅するためにはAdvantage-GC 2 Polymerase MixまたはAdvantage-GC 2 PCR Kitの使用をお勧めする。
なお、GCリッチな哺乳類ゲノムDNAをより長く増幅する場合には、Advantage GC Genoimic LA Polymerase Mix(製品コード 639153)の使用を推奨する。
図1. Advantage-GC 2によるGC含量90%の鋳型の増幅
Human Placenta Marathon-Ready cDNA(製品コード 639311)から、内部にGC含有率90%の110 bp領域を含むIGFR II cDNAの510 bp断片を増幅した。
レーン1:Advantage 2+5% DMSO レーン2:Advantage-GC 2+1.0 M GC-Melt レーン3:Advantage 2+1.0 M GC-Melt レーン 4:Advantage 2+6% DMSO+0.1 M GC-Melt レーンM:DNAサイズマーカー